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高良姜药材中4种有效成分的含量测定范文

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高良姜为姜科山姜属植物高良姜alpinia officinarum hance的干燥根茎,其性热味辛,归脾、胃经,具温胃散寒、消食止痛的功效,用于脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸等。以下是高良姜药材中4种有效成分的含量测定

高良姜黄酮和庚烷均具有调节钙离子释放、抗氧化应激、抗炎、调节免疫、抗病原微生物、抑制平滑肌刺激收缩、镇痛止呕等药理作用[2~5]。高良姜含有十多种黄酮类成分[6]和十多种二苯基庚烷类物质[7],其中高良姜素、山柰素?4′?甲醚、5?羟基?7?(4?羟基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮 (dpha)、5?羟基?1,7?双苯?3?庚酮 (dphc)含量比较高,因此本文选择这4个成分作为监控指标,采用hplc法同时测定不同批号和来源的高良姜药材中的以上的2种黄酮类成分和2种庚烷类成分的含量,为全面准确控制药材质量提供了可行的依据。

1、仪器、试剂与材料

waters2695/2996高效液相色谱仪,empower工作站; bp210d型电子分析天平(德国sartorius公司);高良姜素对照品、山柰素?4′?甲醚对照品、dpha、dphc对照品均为自制,经uv、nmr、ms确定化合物结构,以hplc法按面积归一化法计,质量分数>98.0%;乙腈(色谱纯);超纯水;高良姜药材为各地收集的市售产品,经广东药学院中药鉴定教研室王凤云老师鉴定均为姜科植物高良姜的根茎。

2、方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备

分别精密称取高良姜素、山柰素?4′?甲醚、dpha、dphb、dphc对照品,加甲醇制成每1 ml含1.068、0.414、1.243、0.248、0.989 mg的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各1 ml,置20 ml容量瓶中,加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,制成对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取不同批号的高良姜药材细粉约0.2 g,精密称定,加甲醇约40 ml回流提取2 h,放冷,过滤,滤液加甲醇定容至50 ml。摇匀,用0.45 Μm微孔滤膜滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

2.2 色谱条件

广东药学院学报, 2023,24(5)第5期 陈平,等.高良姜药材中4种有效成分的含量测定色谱柱:diamonsil tmc18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 Μm);流动相:乙腈(a)?0.2%磷酸水(b),梯度洗脱[0~30 min,a?b(39∶42);30~35 min,a?b(45∶55)],检测波长:220 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:30 ℃,进样量:20 Μl。

2. 3 系统适应性试验

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20 Μl注入液相色谱仪,计算理论板数及分离度,结果见表1、图1、图2。

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25 Μl注入液相色谱仪,按“2.2”色谱条件测定,以峰面积积分值为纵坐标,对照品进样量为横坐标绘制标准曲线,结果见表1。表1 系统适应性试验结果

成分线性方程r线性范围/Μg高良姜素y=4.0×106 x+5.1×1040.999 80.267 0~1.328 0山柰素?4′?甲醚y=4.0×106x+2.5×1040.999 90.103 4~0.517 0dphay=2.0×106x+2.0×1040.999 90.310 8~1.554 0dphcy=8.2×105x+4.7×1030.999 40.247 3~1.236 0

2.5 重复性试验

取高良姜药材细粉(批号20170315)约0.2 g,精密称定,共6份,按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液后,按“2.2”色谱条件下测定各组分的含量,结果高良姜素、山柰素?4′?甲醚、dpha、dphc的rsd值(n=6)分别为0.92%、1.60%、0.45%、1.8%,表明方法重现性良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液(批号20170315)1份,分别间隔4、12、24、36、48 h进样,连续测定2 d,计算含量,结果高良姜素、山柰素?4′?甲醚、dpha、dphc的rsd值(n=6)分别为0.71%、1.51%、1.7%、1.9%,表明供试品溶液在48 h内测定结果稳定。

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