1．《铜绿假单胞菌弹性蛋白酶抑制肺表面活性蛋白 A 介导的免疫吞噬作用》
小鼠感染实验 ：经异氟烷麻醉至熟睡状态，分别鼻腔滴入 0.05mL含107菌落形成单位（CFU）PAO1确定菌液吸入 5s; 后，将小鼠放回笼里。18h 后处死小鼠，取肺组织匀浆。匀浆液经系列稀释后涂布 LB平板，过夜培养后菌落计数。
二．《TLR2、TLR4 在铜绿假单胞菌慢性肺感染中的 免疫损伤机制》
1.动物模型建立
将 56 只 BALB/c 雄性小鼠随机分成感染 PA 组和对照组，感染组气道接种 PA 琼
脂糖珠，对照组则接种无菌琼脂糖珠。用盐酸氯胺酮 150mg/Kg 腹腔注射法麻醉小鼠，
麻醉后将小鼠腹部朝上固定在手术鼠板上，用眼科剪将小鼠颈前备皮，颈前剪一0.5cm
纵切口，眼科镊剥离颈前脂肪，充分暴露小鼠气管。用 1ml 注射器灌注 50uL 琼脂糖
珠后，将针头插入小鼠气管中进针至气管底部，快速将琼脂糖珠悬液推入气管内，将
鼠竖起，持续 3-5min，使得琼脂糖珠顺利流入肺内，小鼠有呛咳样反应。伤口予酒
精消毒后不缝合.术后有 6 只小鼠死亡（感染 PA 组剩余 30 只，对照组剩余 20 只）。
2.标本的采集与处理
感染后 1、3、5、7、14 天经腹腔麻醉小鼠后，打开胸腔，经心脏取血处死小鼠，
收集支气管肺泡灌洗液（BLAF），1500rpm 离心 15min,取上清液置于-80℃冰箱备用
于检测细胞因子 IL-6，IL-17。细胞沉淀加入 1mlPBS 中行细胞计数，再洗离心后细
胞沉淀瑞氏染色行细胞分类。新鲜的右肺上叶称量后进行肺组织匀浆。剩余右肺保存
在 4％多聚甲醛溶液中固定，制成病理切片，病理切片采用苏木精-伊红（H-E）染色
法。取左肺放置-80℃冰箱保存，
三．《钙结合蛋白 S100A9 在小鼠铜绿假单胞菌肺炎中的表达及意义》
肺炎组：取培养好的铜绿假单胞菌标准株用生理盐水配制成 2个麦氏单位浓度（6×108cfu/ml）菌液，戊巴比妥钠腹腔麻醉小鼠后，用手术刀切开颈部皮肤暴露气管，用 0.5ml 空针抽取等量铜绿假单胞菌液，经环甲膜穿刺，从气管中灌入 0.03ml 菌液，缝合好切口。，将制备好的模型小鼠于灌菌液后第 3、9h 分别抽取9 只和 10 只处死。
四．《铜绿假单胞菌肺部感染小鼠模型中IL-17A 的表达研究》
待细菌悬液配制后经腹腔注射300 mg /kg、10%水合氯醛，待麻醉完全后用皮筋、胶布将其固定于木板( 40 度斜坡) 上。于颈部备皮后进行消毒，将颈部皮肤切开，促使出气管暴露。对照组应用注射器( 1 mL) ，通过气管注入无菌生理盐水0. 03 mL; 实验组采用注射器( 1 mL) 通过气管注入细菌混悬液0. 03 mL。维持小鼠头高足低体位，予以左右旋转，促使分布于两肺间的药液均匀。于注药后采血将小鼠处死，采集与制作小鼠血清标本与肺组织标本，离心处理血液标本，留取血清，存于冰箱( － 70 ℃) 中备用。继后，应用免疫组化法对小鼠肺组织中的IL-17A 表达量进行检测。
五．《PcrV被动及主动免疫在多重耐药铜绿假单胞菌致肺损伤保护作用研究》
选择成年雄性Balb/c小鼠及多重耐药菌株R4,Avertin250mg/kg腹腔注射麻醉后,小鼠头抬高45度,用LED灯置于小鼠颈部正中,采用小鼠灌胃针(22G)插入气管后在隆突处左转插入左侧主支气管,通过气道滴入50ulPBS (含有R4菌液)至左肺制作肺损伤模型。小鼠垂直放置10分钟后,以利于液体在肺部的分部,并应用白炽灯炮加热保暖。
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