范文一：关于a受体和β受体
很多同学在学习“受体”的时候非常的混乱，不明白这个药物为何可以激动a受体，又作用于β受体，到底怎么区分这个药物是作用与什么受体，这里给大家一个总结，也罗列了一些具体的药物，希望能对大家有帮助～β-受体阻滞剂
药理作用:?阻滞β受体:肾上腺素能β受体分为β1和β2，β1 受体激动心脏产生变力性和变时性作用，β2 受体激动引起支气管扩张、子宫平滑肌松弛及胰岛素产生增加。选择性β1受体阻滞剂治疗量对心脏β1受体阻滞作用强，对β2受体阻滞作用弱;非选择性β受体阻滞剂则在相似浓度对β1和β2均有阻滞作用。选择性β1受体阻滞剂有:氨酰心安、倍他乐克、康可等。非选择性β-受体阻滞剂如心得安。?内源性拟交感活性(ISA):指部分激动肾上腺素能受体的能力。在交感神经张力很低的情况下，某些 β-受体阻滞剂如心得静具有部分激动活性，这些β-受体阻滞剂与受体结合可引起受体部分激动。如患者在平卧位休息时交感神经张力降低，使用具有ISA的 β-受体阻滞剂，心排出量下降较少;而使用无ISA的β-受体阻滞剂，则可引起心排出量明显下降。故在必要情况下，具有ISA的β-受体阻滞剂如心得静可用于有心力衰竭倾向的患者。具有IAS的β阻滞剂有:醋酰心安、卡替洛尔、吲哚洛尔、心得静、心得平等。?膜稳定作用:即降低钠离子的膜通透性，抑制 Na
+快速进入细胞膜，使0相上升速度及幅度降低，而对静息电位和动作电位时间无影响。具有膜稳定作用的β-阻滞剂有:心得平、心得安、心得舒等。?部分 β-阻滞剂具有扩张血管的作用:它们不仅有β-受体阻滞作用，也有阻滞α受体的作用，使周围血管扩张。这些药物有:卡特洛尔和拉贝洛尔。?β-阻滞剂对代谢的影响:长期应用β-受体阻滞剂可使血清甘油三酯升高，高密度脂蛋白降低，但具有ISA的β阻滞剂无此不良作用;β-阻滞剂的应用可影响葡萄糖代谢，使低血糖不易恢复，这是由于肌糖元分解成葡萄糖的途径被阻断之故，这主要见于无选择性、无内源性拟交感作用的β-阻滞剂。?β-阻滞剂的其它作用:心得安、卡地洛尔、吲哚洛尔有抗血小板聚集的作用。
β受体激动剂包括非选择性的β受体激动剂如异丙肾上腺素及选择性心脏β1受体激动剂如多巴酚丁胺,选择性β2受体激动剂如沙丁胺醇、叔丁、喘宁等。β2受体激动剂其通过兴奋气道平滑肌和肥大细胞膜表面的β2受体，舒张气道平滑肌、减少肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒及其介质的释放、降低微血管的通透性、增加气道上皮纤毛的摆动等缓解哮喘症状。此类药物较多，可分为短效(作用维持4,6小时)和长效(维持12h)β2受体激动剂。后者又可分为速效(数分钟起效)和缓慢起效(半小时起效)两种。
β2受体激动剂
1(短效β2受体激动剂常用的药物如沙丁胺醇(Salbutamol)和特布他林(Terbutalin)等。
吸入:可供吸入的短效β2受体激动剂包括气雾剂、干粉剂和溶液等。这类药物松弛气道平滑肌作用强，通常在数分钟内起效，疗效可维持数小时，是缓解轻、中度急性哮喘症状的首选药物，也可用于运动性哮喘的预防。如沙丁胺醇每次吸入100,200μg或特布他林250,500μg，必要时每20min重复1次。1h后疗效不满意者，应去医院就诊。这类药物应按需间歇使用，不宜长期、单一使用，也不宜过量应用，否则可引起骨骼肌震颤、低血钾、心律紊乱等不良反应。压力型定量手控气雾剂(Pmdi)和干粉吸入装置吸入短效β2受体激动剂不适用于重度哮喘发作。其溶液(如沙丁胺醇、特布他林、非诺特罗及其复方制剂)经雾化泵吸入适用于轻、重度哮喘发作。
口服:如沙丁胺醇、特布他林、丙卡特罗片等，通常在服药后15,30min起效，疗效
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维持4,6h。沙丁胺醇2,4mg，特布他林1.25,2.5mg，每天3次;丙卡特罗25,50μg，每天2次。使用虽较方便，但心悸、骨骼肌震颤等不良反应比吸入给药时明显。缓释剂型和控释剂型的平喘作用维持时间可达8,12h，特布他林的前体药——班布特罗的作用可维持24h，这些药可减少用药次数，适用于夜间哮喘患者的预防和治疗。长期、单一应用β2受体激动剂可造成细胞膜β2受体的向下调节，表现为临床耐药现象，故应予避免。
2(长效β2受体激动剂这类β2受体激动剂的分子结构中具有较长的侧链，因此具有较强的脂溶性和对β2受体较高的选择性。其舒张支气管平滑肌的作用可维持12h以上。目前在我国上市的吸入型长效β2受体激动剂有两种:?沙美特罗(salmeterol):经气雾剂或碟剂装置给药，给药后30min起效，平喘作用可维持12h以上。推荐剂量50μg，每天2次吸入。?福莫特罗(formoterol):经都保装置给药，给药后3,5min起效，平喘作用维持8,12h以上。平喘作用具有一定的剂量依赖性，推荐剂量4.5,9μg，每天2次吸入。吸入长效β2受体激动剂适用于哮喘(尤其是夜间哮喘和运动诱发哮喘)的预防和持续期的治疗。福莫特罗因起效迅速，可按需用于哮喘急性发作时的治疗。
近年来推荐联合吸入糖皮质激素和长效β2受体激动剂治疗哮喘。这两者具有协同的抗炎和平喘作用，可获得相当于(或优于)应用加倍剂量吸入型糖皮质激素时的疗效，并可增加患者的依从性、减少较大剂量糖皮质激素引起的不良反应，尤其适合于中、重度持续哮喘患者的长期治疗。目前在我国上市的有舒利迭(氟地卡松/沙美特罗:100,250/50μg)和信必可(布地奈德/福莫特罗:160/4.5μg)
α1，α2肾上腺素受体阻断药
早期的α受体阻断药多属此类，其中，酚妥拉明和妥拉唑啉对α1受体和α2受体的选择性很低，酚苄明对α1受体仅具中等程度的选择性。从作用时间看，又有长效与短效之分。
(一)短效类
本类药物与α受体结合较松，易于解离。是竞争性α受体阻断药。它们可使激动药的量效曲线平行右移，增加激动药的剂量仍可达到最大效应。
酚妥拉明
「体内过程」酚妥拉明(phentolamine)又名瑞支亭(regitine)，生物利用度低，口服效果仅为注射给药的20%.口服后30分钟血药浓度达峰值，作用维持约3,6小时;肌内注射作用维持30,45分钟。大多以无活性的代谢物从尿中排泄。
「药理作用」选择性地阻断α受体，拮抗肾上腺素的α型作用，但作用较弱。
1.血管静脉注射能使血管舒张，血压下降，肺动脉压和外周血管阻力降低。其机制主要是对血管的直接舒张作用，大剂量也出现阻断α受体的作用。
2.心脏对心脏有兴奋作用，使心收缩力加强，心率加快，输出量增加。这种兴奋作用部分由血管舒张，血压下降，反射地引起;部分是阻断神经末梢突触前膜α2受体，从而促进去甲肾上腺素释放的结果。偶可致心律失常。
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3.其他有拟胆碱作用，使胃肠平滑肌兴奋。用组胺样作用，使胃酸分泌增加，皮肤潮红等。
「临床应用」
1.用于外周血管痉挛性疾病如肢端动脉痉挛性病等。
2.在静脉滴注去甲肾上腺素发生外漏，可用本品5mg溶于10,20ml生理盐水中，作皮下浸润注射。也用于肾上腺素等拟交感胺过量所致高血压。
3.用于肾上腺嗜铬细胞瘤的诊断和此病骤发高血压危象以及手术前的准备，能使嗜铬细胞瘤所致的高血压下降。作诊断试验时，曾有致死的报告，故应特别慎重。
4.用于抗休克，能使心搏出量增加，血管舒张，外周阻力降低，从而改善休克状态时的内脏血液灌注，解除微循环障碍。并能降低肺循环阻力，防止肺水肿的发生，但给药前必需补足血容量。有人主张合用去甲肾上腺素，目的是对抗去甲肾上腺素的α型收缩血管的作用，保留其β型加强心肌收缩力的作用。
5.有报告用酚妥拉明等血管扩张药治疗其他药物无效的急性心肌梗塞及充血性心脏病所致的心力衰竭，在心力衰竭时，因心输出量不足，交感张力增加，外周阻力增高，肺充血和肺动脉压力升高，易产生肺水肿。应用酚妥拉明扩张血管，降低外周阻力，使心脏后负荷明显降低，左室舒张末期压与肺动脉压下降，心搏出量增加，心力衰竭得以减轻。
「不良反应」常见的反应有低血压，胃肠道平滑肌兴奋所致的腹痛、腹泻、呕吐和诱发溃疡病(可能与其胆碱受体激动作用有关。)静脉给药有时可引起严重的心率加速，心律失常和心绞痛，因此须缓慢注射或滴注。胃炎，胃、十二指肠溃疡病，冠心病患者慎用??
妥拉唑啉
妥拉唑淋(toalzoline，苄唑淋)对α受体阻断作用与酚妥拉明相似，但较弱，而组胺样作用和拟胆碱作用较强。口服和注射都易吸收，大部分以原形从肾小管排泄。口服吸收较慢，排泄较快，效果远不及注射给药。主要用于血管痉挛性疾病的治疗，局部浸润注射用以处理去甲肾上腺素静脉滴注时药液外漏。不良反应与酚妥拉明相同，但发生率较高。
(二)长效类
以酚苄明和二苄明为代表的长效α受体阻断药与α受体形成牢固的共价键。在离体实验时，即使加入高浓度的儿茶酚胺，也难与之竞争，达不到最大效应，故可压低激动剂的量效曲线，所以也称非竞争性α受体阻断药。
酚苄明
酚苄明(phenoxybenzamine)又史苯苄胺(dibenzyline)，是人工合成品。
「体内过程」口服有20%,30%吸收。因刺激性强，不作肌内或皮下注射仅作静脉注射。
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静脉注射1小时后可达最大效应。本品的指溶性高，大剂量用药可积蓄于脂肪组织中，然后缓慢释放。12小时排泄50%，24小时排泄80%，一周后尚有少量存留在体内。
「药理作用」酚苄明进入体内后，其分子中的氯乙胺基须环化形成乙撑亚胺基，后者才能与α受体牢固结合，加以排泄缓慢，故阻断α受体作用起效慢，但作用强大而持久。一次用药，作用可维持3,4天。能舒张血管降低外周阻力。对于静卧的正常人，缓慢静脉注射一般剂量(1mg/kg)，收缩压改变很少而舒张压下降。但当伴有代偿性交感性血管收缩如血容量减少或直立时，就会引起显著的血压下降。由于血压下降所引起反射作用，加上阻断突触前α2受体作用和对摄取1，摄取2的抑制作用，可使心率加速。
「临床应用」用于外周血管痉挛性疾病，也可用于休克和嗜铬细胞瘤的治疗。
「不良反应」常见的有体位性低血压，心悸和鼻塞;口服可致恶心，呕吐及思睡，疲乏等。静脉注射或用于休克时必须缓慢，充分补液和密切监护。
二、α肾上腺素受体阻断药
哌唑嗪(prazosin)选择性地阻断α1受体而对α2受体的阻断极少，因此不促进去甲肾上腺素的释放，加快心率的副作用较轻，口吸取有效。近年合成不少哌唑嗪的衍生物，成为一类新型降压药，将在第二十五章中叙述。
三、α2肾上腺素受体阻断药
育亨宾(yohimbine)能选择性地阻断α2受体，主要用于作科研的工具药。 本类药物可竞争性地与β受体结合而产生拮抗神经递质或β激动剂的效应。β受体可分为β1和β2两种亚型，故本类药物按其选择性又可分为β1、β2受体阻断药(如普萘洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔及烯丙洛尔等)、β1受体阻断药(如阿替洛尔、醋丁洛尔)两亚类。本类中有些药物除阻断β受体外，还具有一定的内在活性，即可产生较弱的激动β受体的作用。在一般情况下，由于其激动作用较弱，所产生的效应往往被阻断作用所掩盖。因此，上述两亚类药物尚可再分为无内在拟交感活性者和有内在拟交感活性者。
α1 、α2 受体激动药 去甲肾上腺素(Noradrenaline NA ，or Norepinephrine NE) 体内来源:去甲肾上腺素能神经末梢、肾上腺髓质释放。药用品，人工合成。 性质:不稳定，遇光或碱、氧化变成粉红色，药用品为重酒石酸盐。 [体内过程] 1 给药方法:只宜静脉滴注法给药，为什麽, ? 口服收缩胃黏膜，在碱性肠液易分解。 ? 皮下注射收缩血管，发生组织坏死。 ? 静脉推滴，引起BP急剧升高，心律紊乱 2 分布:心、肾上腺髓质、血管等 3 摄取1和摄取2 代谢: 经COMT、MAO转化，最后的代谢产物为3-甲氧-4-羟扁桃酸(VMA，90%)，或间甲去甲肾上腺素和间甲肾上腺素。统称为儿茶酚胺的代谢产物。 排泄:尿中以VMA为主(90%)。少量原形NA 4%~16%，结合型间甲NA 和间甲NA。 [药理作用] 1(心血管作用 ? 血管与血压: ? 血管:皮肤、粘膜、内脏的血管收缩的小动脉和小静脉收缩; 皮肤、黏膜 >肾血管 > 脑、肝、肠系膜血管 > 骨骼肌血管。 ? 血压?:血管收缩，外周阻力加大。 冠脉流量?: 直接作用: 兴奋β2? 冠状血管舒张?灌注压增加 间接作用:心脏兴奋 ?腺苷增加?冠脉扩张?冠脉流量? 血压?? 灌注压??冠脉流量? ? 心脏: 离体心脏:兴奋β1受体，?心率?，传导加快?，心输出量?, (+)β1受体 ?窦房结兴奋，传导加快，心率加快。 (+)β1受体?心收缩力增加，心输出量增加。 整体心脏:
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心率? , 减压反射作用 、 2( 代谢:大剂量时使血糖?(兴奋a1、) [临床应用] 1(急
性低血压症状:由嗜铬细胞瘤切除术、交感神经切除术、败血症、药物反应等引起的。
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范文二：α受体与β受体
α受体与β受体α型肾上腺素能受体
α受体为传出神经系统的受体，根据其作用特性与分布不同分为两个亚型：α1、α2。
α1受体主要分布在血管平滑肌（如皮肤、粘膜血管，以及部分内脏血管），激动时引起血管收缩；
α1受体也分布于瞳孔开大肌，激动时瞳孔开大肌收缩，瞳孔扩大。
β受体：
儿茶酚胺受体之一。一般为抑制的反应，儿茶酚胺与β受体作用可引起血管、子宫和支气管肌等弛缓和心脏兴奋。 β1受体主要分布于心脏，可增加心肌收缩性，自律性和传导功能；
β2受体主要分布于支气管平滑肌，血管平滑肌和心肌等，介导支气管平滑肌松弛，血管扩张等作用；
β3受体主要分布于白色及棕色脂肪组织，调节能量代谢，也介导心脏负性肌力及血管平滑肌舒张作用。
范文三：溶血磷脂酸受体及下游信号通路在心脏细胞生长中的调节作用
生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2007, 59 (5): 619-627http://www.actaps.com.cn综 述619
溶血磷脂酸受体及下游信号通路在心脏细胞生长中的调节作用
陈 曦*
中国医学科学院/中国协和医科大学心血管病研究所，阜外心血管病医院，北京 100037
摘 要：溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA)是一种十分活跃的磷脂信号分子，具有广泛的生物学效应，包括诱导神经轴突回缩、应力纤维形成、促进血小板凝集、诱导平滑肌收缩、刺激血管平滑肌细胞增殖等。LPA通过其受体及耦联的G蛋白调节细胞内信号途径，介导各种生物学效应。心脏组织中存在多种LPA受体亚型，尤其受体LPA1亚型在心脏组织中的含量仅次于脑，位居第二，暗示LPA在心脏中有重要的生物学功能。本文着重对LPA的5种受体亚型的组织分布、与G蛋白的耦联和对第二信使的活性调节，以及LPA及其受体亚型对心脏细胞的生长调节作一综述。关键词：溶血磷脂酸受体；心脏；细胞增殖；肥大；凋亡中图分类号：R331.3+1；Q257
Lysophosphatidic acid receptors and the downstream signaling pathways inregulation of cardiac cell growth
CHEN Xi*
Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing100037, China
Abstract: Lysophosphatidic acid (LPA) is a bioactive phospholipid messenger with multiple biological functions, including inductionof neurite retraction, stress fiber formation, promotion of platelet aggregation and stimulation of smooth muscle contraction and cellproliferation. LPA exerts various biological functions through G protein-coupled receptors and the downstream cellular signalingpathways. LPA and its receptors may also play important roles in the heart since several LPA receptor subtypes exist in the heart andespecially the level of LPA1 subtype is the second highest, just lower than that in the brain. The review was focused on 5 subtypes ofLPA receptor, mainly on their tissue expression pattern, coupled G proteins and signal pathways, as well as the roles of LPA and itsreceptors in regulation of cardiac cell growth.
Key words: lysophosphatidic acid receptors; heart; cell proliferation; hypertrophy; apoptosis
溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA)是一种结构最简单的水溶性甘油磷脂，其化学结构名称为1-酰基-2-羟基-3-磷酸甘油 (1-acyl-2-hydroxy-sn-glycerol-3-phosphate)。以往认为LPA是脂质合成前体，后来逐步发现LPA具有广泛的生物学效应[1,2]，可以诱导神经轴突回缩、应力纤维形成、促进细胞
增殖/凋亡、血小板聚集、肿瘤细胞浸润等。 LPA可以引起多种血管反应，如激活血小板、促进血管平滑肌收缩和细胞增殖、活化内皮细胞，与高血压、动脉粥样硬化形成和发展密切相关[3-6]。我们课题组的研究显示，LPA参与心肌细胞和心脏成纤维细胞的生长调节，与心脏重构的病理生理过程相
Received 2007-08-01 Accepted 2007-08-30
This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 30170374) and the National Basic ResearchDevelopment Program of China (No. G2000056905, 2007CB512108).
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Corresponding author. Tel: +86-10-88398584; E-mail: [email protected]
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关[7,8]。因而，LPA也是一种心血管活性物质。LPA的上述各种生物学作用主要是通过G蛋白耦联的受体介导下游信号通路实现的。
1 LPA受体
目前，在哺乳动物中已经确定存在5种LPA受体，LPA1~LPA5。其中LPA1~LPA3基因编码具有高度同源性，同属于内皮分化基因(endothelial dif-ferentiation gene, Edg)家族，而LPA4和LPA5同源性较高；在系统进化树上它们分属于两个不同的分支[9]。
1.1 Edg家族的LPA受体
1996年Hecht等[10]从小鼠TSM细胞系中分离出vzg-1基因，并鉴定其为LPA受体，这是第一个被确认的LPA受体，LPA1/Edg2。LPA1是一个7次跨膜蛋白，由365个氨基酸组成，分子量约为41kDa。原位杂交显示vzg-1位于大脑皮质神经母细胞增殖区。Northern blot分析显示vzg-1在胚胎脑中大量表达。vzg-1过表达可引起LPA依赖的神经轴突回缩和细胞圆化，还可介导LPA诱导的Gi蛋白的活化，但Gi蛋白的活化与细胞圆化无关。LPA1通过耦联Gi蛋白介导LPA对胞内cAMP水平的抑制。LPA1的发现第一次将胞外LPA与胞内被LPA激活的信号系统通过受体连接起来，为神经和非神经系统关于LPA的研究打开一扇新的门户。
1997年An等[11]从人肺cDNA文库获得人源Edg2的基因克隆，编码364个氨基酸的蛋白。人源LPA1广泛分布于脑、心脏、胃肠道与生殖系统，其中在心脏组织中的含量仅次于脑，位居第二；Contos等[12]分析显示LPA1在成年小鼠心脏中也呈高表达，暗示LPA在心脏中有重要的生物学功能。
1998年An等[13]发现一种新的LPA受体，LPA2/Edg4。这种人源LPA2由382个氨基酸组成，分子量约为42 kDa。它与人LPA1氨基酸的同源性为72%。An等比较了LPA1和LPA2的组织分布，Northern blot分析显示两者组织分布完全不同。人的LPA2主要分布于睾丸、胰腺、前列腺、脾脏、胸腺，而LPA1高表达的脑、心脏、消化道等脏器中几乎检测不到LPA2。LPA2可介导LPA诱导的SRE报告基因的表达，此表达依赖于Gi蛋白和RhoGTPase的活化。人LPA2的发现及其与LPA1组织分布的差异说明LPA在不同组织中可能产生不同的生物学作用，各种受体亚型有其各自独立的调节
方式。
1999年Bandoh等[14]和2000年Im等[15]先后在各自的实验室分别独立克隆了人Edg7基因，并将其确定为LPA的第三种受体亚型，LPA3。人LPA3由353个氨基酸组成，分子量约为40 kDa。就氨基酸序列相似性比较，LPA3与LPA1、LPA2 分别有53.7%和48.8%的同源性。LPA3的组织分布也很局限，这一点类似于LPA2。人LPA3主要在心脏、胰腺、前列腺和睾丸中表达，脑和消化系统未见Northernblot杂交信号[14,15] ；大鼠LPA3主要分布于肾脏和睾丸，而脑、消化系统等也均无表达[15]。
随着LPA受体亚型的逐步发现，多个研究小组对各亚型的功能和与G蛋白的耦联方式进行了研究。Bandoh等[14]将人源LPA的3种受体亚型基因分别导入Sf9细胞中，Im等[15]将小鼠LPA1、人LPA2和人LPA3基因分别转染至Rh7777细胞。两研究组的结果均显示，LPA2和LPA3介导LPA诱导的胞内钙浓度升高，而LPA1不影响这种钙运动。上述胞内钙运动对百日咳毒素(pertussis toxin, PTX)不敏感，却对磷脂酶C (phospholipase C, PLC)的抑制剂敏感，说明LPA2和LPA3通过耦联Gs蛋白介导钙的胞内运动[14]。
LPA可以浓度依赖地抑制cAMP在细胞内的积累。Im等[15]研究表明，这种抑制作用是LPA1介导的，且是通过与Gi蛋白耦联实现的；人LPA2和LPA3均不参与LPA对胞内cAMP水平的抑制，与PTX也无关。Bandoh等[14]研究却显示，在转染了Edg4或Edg7的Sf9细胞中，先以forskolin诱导胞内cAMP浓度积累到较高水平后，LPA刺激不但不会抑制这种cAMP的积累，反而会使cAMP浓度进一步升高，且刺激效应对PTX不敏感；Edg2不发生上述刺激cAMP浓度升高的现象。说明人源LPA的3种受体亚型不但没有介导LPA抑制胞内cAMP浓度的作用，而且LPA2和LPA3可能与Gi蛋白以外的某种G蛋白耦联促进cAMP浓度升高。Ishii等[16]将小鼠LPA的3种受体亚型基因分别转染至B103细胞，结果显示3种受体亚型均介导LPA对腺苷酸环化酶的抑制作用，且对PTX敏感，即LPA可以通过小鼠任何一种LPA受体亚型耦联Gi蛋白，从而实现对胞内cAMP积累的抑制作用。
LPA具有生长因子样的作用，能够刺激多种细胞增殖，激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinases, MAPKs)[17]。因而LPA受体在MAPKs
陈 曦：LPA受体及下游信号通路在心脏细胞生长中的调节作用
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激活中的介导作用成为另一个主要的研究靶标。Bandoh等[14]研究显示Edg2与Edg7均不激活MAPKs，只有Edg4激活MAPKs。Ishii等[16]的实验结果表明3种受体亚型均介导LPA对MAPKs的活化。上述矛盾现象说明可能在不同的组织中，细胞内信号转导通路不同；还有可能不同种属间LPA受体亚型的氨基酸序列细微差异导致蛋白质结构变化，从而耦联不同种类的G蛋白，引发不同信号通路的激活或失活，最后产生不同的生物学效应。
Ishii等还进一步比较了3种受体亚型在LPA其它生物学效应中扮演的角色。结果显示，3种受体亚型在LPA诱导的肌醇磷酸的产生和花生四烯酸的释放中作用相似，仅在效率和作用强度上有所差异。然而，在LPA诱导细胞骨架形变的过程中，各受体的作用大相径庭。Edg2和Edg4可以介导LPA诱导的细胞圆化，LPA3过表达反而导致神经轴突延长、抑制LPA诱导的细胞圆化[16]。总之，3种受体亚型在介导LPA的生物学功能时或有分享或有所区别，这反映体内可能存在具有重叠性质的元件为细胞发挥重要生物学功能提供了保障，而不同性质的信号又保证了细胞更特异的生物学功能。1.2 非Edg家族的LPA受体
前3种LPA受体几乎以每年一个的速度被发现，而后间隔了4年，Noguchi等[9]在2003年报道了第4种LPA受体。该研究组将G蛋白耦联的孤儿受体p2y9/GPR23确定为LPA4。这是一个与以往LPA受体结构差异很大的蛋白质，其氨基酸序列同源性仅为20%~24%；在系统进化树上LPA4与血小板激活因子(platelet-activating factor, PAF)的G蛋白耦联受体较接近。人LPA4由370个氨基酸组成，分子量约为42 kDa。实时定量PCR检测表明人LPA4广泛表达于各组织，但除了在卵巢组织表达十分丰富外，胸腺、胰腺、小肠、脑、心脏等组织中均很微弱[9]。Lee等[18]的Northern blot分析显示，LPA4广泛表达于胚胎组织(包括胚脑)中。
最近Lee等[18]进一步研究了LPA4所介导的细胞信号通路。通过G蛋白minigene和药理学干预方法的研究表明，LPA4通过G12/13和Rho活化介导神经轴突回缩和应力纤维的形成；通过Gq和Gi蛋白介导胞内钙运动和非选择性阳离子流发生；通过Gs蛋白介导胞内cAMP浓度升高。
2006年Lee等[19]报道了人和小鼠的第5种LPA受体，LPA5/GPC92。在系统进化树上，它与LPA4
更接近，二者的氨基酸序列同源性为35%。小鼠LPA5富含于小肠，同时以低水平广泛分布于多种脏器，包括脾脏、胃、胸腺、皮肤、肺、肝脏、胚胎干细胞、胚肝、胚脑和背根神经节(dorsalroot ganglion, DRG)，但在脑和心脏中，Northernblot方法未检测到LPA5的表达。LPA5在外周神经系统表达，暗示着它可能与这些系统的疾病过程相关；LPA5在胚胎干细胞中的广泛表达也可能扩展它在发育和干细胞功能中的作用。
LPA5所介导的生物学效应和信号转导通路研究表明，LPA5通过G12/13和RhoA活化介导LPA浓度依赖的神经轴突回缩和应力纤维的形成；通过Gβγ介导LPA诱导的胞内cAMP浓度升高；通过Gq介导LPA诱导的胞内钙浓度升高。另外，LPA5还介导LPA促进非选择性阳离子流升高[19]。
综上所述，LPA1广泛表达于各种组织，脑和心脏中的表达尤其丰富；LPA2和LPA3组织分布局限，前者在睾丸、胰腺、外周白细胞等，后者在心脏、胰腺、前列腺、睾丸等；LPA4广泛低水平表达于各种组织，只在卵巢中强表达；LPA5表达比较广泛，尤其在多种胚胎组织中表达，但在脑和心脏中不表达(表1)。心脏组织中LPA受体亚型主要为LPA1和LPA3，LPA4表达很微弱，LPA2和LPA5不表达或几乎检测不到，推测LPA1和LPA3在心脏组织中起重要的生物学作用。我们课题组最近关于LPA对心脏细胞生长调节作用的研究结果证实了这一点。
LPA是一种十分活跃的磷脂信号分子，从上述已发现的各种LPA受体亚型组织分布、耦联的G蛋白和介导第二信使激活的能力上的差异性和共同性，说明LPA通过各组织中不同的LPA受体耦联多种G蛋白和信号通路，介导不同的生物学效应；同时，LPA又通过具有兼容性能的生物元件为细胞的重要生物学功能提供保障。
2 LPA及其受体和心脏重构
心脏细胞主要包括心肌细胞和心脏成纤维细胞。心脏重构主要表现为心肌细胞的肥大、凋亡和心脏成纤维细胞的增生、胶原代谢异常。阐明心脏细胞的生长调节机制，适时有效地调节心肌细胞和心脏成纤维细胞的行为是调控心脏重构的重要途径。LPA的生长因子样功能和LPA受体在心脏组织中的表达特征暗示着LPA在心脏细胞生长调节和
622 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2007, 59 (5): 619-627表1. LPA受体亚型的组织分布
Table 1. LPA receptor subtype expression in tissues
High Moderate Low Hardly detectable/
Receptors Species
expression expression expression No expressionLPA1/vzg-1/Edg2
HumanMouse
Embryonic cerebralcortex, testis, brain,lung, heart, spleen,intestine
Brain, heart, colon,small intestine
Placenta, prostate,pancreas, testis,ovary, spleen
LPA2/Edg4
Human
Testis, leukocytes
Pancreas, prostate,thymus, spleen
Mouse
Testis, kidney, embryonic brain
Lung, spleen,thymus, stomachKidney, skeletalmuscle
Stomach, thymus,muscle, kidney
Liver
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LPA3/Edg7
MouseRat
Kidney, testis, lung,brain (around birth)Kidney, testis
Small intestine,heart, thymus
Embryonic brain,spleen, stomach
Liver, adult brainCerebellum, cortex,wholebrain, fetus, stomach,intestine, adrenal
12, 2115
HumanHeart, pancreas, prostate, testis, forebrainLung, ovaryBrain, placenta, liver,skeletal muscle, spleen,kidney, thymus, smallintestine, colon, leukocytes,stomach, bladder, ovary,uterus
14, 15
LPA4/(p2y9/GPR23)
HumanOvaryThymus, pancreas,small intestine,testis, heart, brain,spleen, colon, placenta,skeletal muscle
Liver, kidney, leukocytes9
LPA5/GPC92
MouseSmall intestineSpleen, stomach,thymus, skin
Lung, liver,embryonic stemcells, bone marrow,fetal liver, embryonicbrain
Brain, heart, kidney,tesis, muscle
19
心脏重构中扮演重要的角色。2.1 LPA诱导心肌细胞肥大
2000年Xu等的研究显示，LPA可以激活与蛋白质合成有关的两种激酶p90-核糖体S6激酶和p70-核糖体S6激酶，从而推测LPA可以诱导心肌细胞肥大[22]。2004年Hilal-Dandan等以细胞形态、心房钠尿因子(atrial natriuretic factor, ANF)-荧光素酶报告基因等观测指标证实LPA长时间刺激(48 h)可引起大鼠乳鼠心肌细胞肥大[23]，我们课题组最近的实验也证实了这一点[7]。
我们课题组最近分析了LPA受体亚型在大鼠乳鼠心肌细胞中的分布及其与心肌细胞肥大的关系[7]。
陈 曦：LPA受体及下游信号通路在心脏细胞生长中的调节作用
623
研究表明，LPA1~LPA3在大鼠乳鼠心肌细胞中均有表达。利用LPA受体亚型的特异性拮抗剂和激动剂分别抑制或单独诱导某种受体亚型，以细胞形态、3H-Lue掺入、ANF-荧光素酶报告基因表达等指标反映心肌细胞肥大情况，结果显示，LPA1与LPA3的拮抗剂二辛基甘油焦磷酸[dioctylglycerol py-rophosphate (8:0), DGPP]能够完全抑制LPA诱导的心肌细胞肥大，LPA3的特异激动剂1-油酰-2-甲氧基-甘油磷脂硫代硫酸(oleoyl-methoxy phosphothio-nate, OMPT)可以诱导心肌细胞肥大，而LPA2的特异激动剂十二烷基磷酸(dodecylphosphate)则无此效应(图1)。由于目前还没有单独针对LPA1或LPA3的特异拮抗剂，也没有LPA1的特异激动剂，因此我们认为LPA1和/或LPA3介导了LPA诱导大鼠心肌细胞肥大的生物学效应。
细胞肥大是一个胞内多条信号通路参与网络调控的过程。大量研究证据表明Gq蛋白在心肌肥厚中起着核心作用，许多与Gq蛋白耦联的激动剂如血管紧张素(angiotensin II, AngII)、内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)和去氧肾上腺素(phenylephrine, PE)等通过Gq-PLC-蛋白激酶C (protein kinase C, PKC)通路刺激心肌细胞肥大，而LPA则与上述传统的激动剂不同，它刺激大鼠乳鼠心肌细胞肥大是PTX敏感的，也不需要PLC和PKC的活化，即通过耦联Gi蛋白而不是Gq蛋白诱导肥大效应[23]。
MAPK通路是经典的细胞增殖和肥大的信号通路。Hilal-Dandan等的研究表明Gi介导的细胞外信
号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)的活化参与了LPA诱导的心肌细胞肥大，而p38MAPK与此效应无关。此外，G12介导的Rho的活化与Gi/ERK协同作用上述心肌细胞的肥大[23]。Bogoyevitch 等的研究也显示，大鼠乳鼠心肌细胞中ERK的活化可以通过Gq耦联，也可以由Gi介导，但LPA激活ERK是通过Gi蛋白而不是Gq蛋白。
近年研究发现，核因子κB (nuclear of immuno-globulin κ locus in B, NF-κB)的活化也是心肌细胞发生肥大的重要条件[25]，磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylino-sitol 3-kinase, PI3K)是细胞内重要的生长存活通路[26]。同样，这些研究也多来自与Gq蛋白耦联的激动剂PE、ET-1、AngII等。我们课题组最近的研究显示，尽管在上游通路中LPA表现出与其它促肥大因子的差异性，但殊途同归，LPA也可以激活NF-κB通路(图2)和PI3K/Akt/mTOR通路，并且这两条通路均介导了LPA诱导的心肌细胞肥大效应。进一步的通路网络关系研究表明，ERK1/2位于NF-κB的上游，但Akt的抑制不影响NF-κB的激活，说明Akt是与ERK1/2-NF-κB平行的通路。我们的结果第一次阐明了受体水平介导的LPA诱导心肌细胞肥大的信号机制，同时也更完善了下游的信号通路调节机制(图3)[7]。
LPA除了可以诱导心肌细胞肥大以外，Karliner等的研究表明，LPA对低氧环境下生长的大鼠心肌细胞有促存活效应，但其作用机制还不清楚[27]。2.2 LPA调节心脏成纤维细胞生长
[24]
图 1. DGPP，dodecylphosphate和OMPT对大鼠心肌细胞3H-leucine掺入的影响
Fig.1. Effects of DGPP (A), dodecylphosphate (B) and OMPT (C) on 3H-leucine uptake in rat cardiomyocytes. DGPP, dioctylglycerolpyrophosphate, antagonist of LPA1 and LPA3; OMPT, oleoyl-methoxy phosphothionate, specific agonist of LPA3; dodecylphosphate,specific agonist of LPA2. mean±SD. **P
.
624 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2007, 59 (5): 619-627
图 2. LPA刺激大鼠心肌细胞p65的磷酸化和NF-κB-荧光素酶的活性
Fig. 2. LPA stimulates phosphorylation of p65 (A) and NF-κB-luciferase activity (B) in rat cardiomyocytes. PDTC, pyrrolidinedithiocarbamate, inhibitor of NF-κB. mean±SD. **P
.
间，从而维持心脏的正常形态。但是在病理情况下，成纤维细胞增殖会使胶原过度积聚，导致心脏刚性太强，限制心肌细胞和肌束收缩，促进组织内电弥散，增加舒张期心肌僵硬度。可见心脏成纤维细胞必须维持稳定的数量才能保证心脏功能正常，其过度增殖是心肌重塑的重要原因。
我们课题组近几年研究了LPA对心脏成纤维细胞的生长调节作用。采用3H-TdR或3H-Leu掺入、Northern blot等实验方法，发现LPA以浓度依赖方式刺激大鼠乳鼠心脏成纤维细胞DNA和蛋白质合成；LPA刺激成纤维细胞c-fos mRNA表达呈时间
图 3. LPA1/LPA3通过ERK/NF-κB和Akt信号通路介导LPA诱导心肌细胞肥大
Fig. 3. LPA1/LPA3 mediate LPA-induced cardiomyocyte hyper-trophy through ERK/NF-κB and Akt signaling pathways. mTOR,mammalian target of rapamycin; PI3K, phosphatidylinositol 3-
kinase.
心脏成纤维细胞的增殖是维持正常心脏功能的一部分，在某些因素造成心肌细胞死亡后，新产生的成纤维细胞可以填补原来心肌细胞遗留下的空
与剂量依赖性；G蛋白耦联受体阻断剂苏拉明(suramin)能有效抑制LPA诱导的DNA合成增加及c-fos mRNA表达上调[28]。我们进一步的研究表明，LPA对体外培养的大鼠心脏成纤维细胞的生长具有双重调节作用，除了上述的促增殖效应，还有致凋亡作用。在低浓度范围内(1~25 μmol/L)，LPA介导心脏成纤维细胞的增殖效应；而在较高浓度，LPA通过诱导凋亡引起心脏成纤维细胞呈浓度依赖的细胞死亡(IC50约为50 μmol/L)，其调节与LPA的受体亚型有关[8]。
陈 曦：LPA受体及下游信号通路在心脏细胞生长中的调节作用
625
RT-PCR实验显示，大鼠乳鼠心脏成纤维细胞中也存在LPA1~LPA3三种受体亚型的表达。DGPP能够完全抑制LPA诱导的3H-TdR掺入，dodecylphosphate对DNA合成没有促进作用，而OMPT可以显著增加DNA合成，提示LPA1和/或LPA3介导了LPA诱导的增殖作用[8]。LPA诱导心脏成纤维细胞凋亡的机制研究显示，DGPP可以抑制高浓度LPA导致的成纤维细胞凋亡，单独激活LPA2与LPA3并不诱发上述凋亡现象，推测LPA1可能介导了LPA的凋亡诱导作用。进一步研究凋亡途径表明，LPA通过引起线粒体损伤，激活凋亡执行蛋白caspase 3来诱导凋亡。这个凋亡过程与MAPKs的活化有关，其中ERK1/2与p38 MAPK可能介导了LPA引起的细胞死亡通路，而与c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases, JNK)无关[8]。综合分析表明，低浓度LPA主要通过LPA3介导心脏成纤维细胞的增殖效应。而在较高浓度，LPA通过LPA1激活线粒体途径引起心脏成纤维细胞凋亡，此凋亡过程与ERK和p38 MAPK的活化有关(图4)。
2.3 LPA及其受体参与急性心肌梗死后的心脏重构
LPA是血清的组成成分之一，循环系统中的LPA与其它脂类一样，主要以血清白蛋白结合的形式存在于血清中。血浆凝溶胶蛋白(gelsolin)也可与LPA结合，并参与LPA生物学功能的调节[29]。 LPA主要来源于活化的血小板[30]，近年来发现卵巢癌细胞、脂肪细胞，损伤的内皮细胞、活化的成纤维细胞、及某些炎症细胞都可以分泌LPA[1,31]。LPA在正常人血清中浓度很低，约为2~20 μmol/L[30,32] ；应激状态，尤其是激活的血小板将释放大量的
图 4. LPA通过不同的受体亚型对大鼠心脏成纤维细胞产生促增殖和促凋亡的双向调节作用
Fig. 4. LPA exerts proliferative and proapoptotic dual actions on
rat cardiac fibroblasts through specific LPA receptor subtypes.
LPA，因而急性心肌梗死有可能导致血清LPA水平发生变化，我们课题组的研究证实了这一推测。透壁性急性心肌梗死患者发生心肌梗死后8 h血清LPA水平即升高，48~72 h达到高峰，约为正常人的7倍，梗后7 d仍高于正常水平[33]。急性心肌梗死患者血清LPA水平升高的病理学意义尚不清楚，它的释放究竟是来源于活化的血小板还是心肌细胞或是其它组织细胞都有待于进一步研究。但LPA作为一种生物活性分子，调节多种细胞的生长，可以引起多种心血管反应，尤其LPA的多种受体亚型在心脏中表达，推测心肌梗死后释放的LPA与梗死后心脏重构的形成和发展密切相关。
我们课题组以结扎左冠状动脉前降支的方法制备了大鼠心肌梗死模型，观察了梗死后早期和中晚期大鼠血流动力学与心功能和心肌重塑的各项指标，并检测了心肌梗死心脏组织的LPA1~LPA3mRNA和蛋白水平的变化。研究结果表明，大鼠急性心肌梗死后出现左心室功能下降，在早期重塑期(术后48 h)心室壁无明显肥厚，但有大量的心肌细胞凋亡，而LPA3蛋白表达明显增加，说明LPA3可能介导LPA在心肌梗死后早期的凋亡或抗凋亡作用。但在梗死后晚期重塑期(4周)，心室壁显著增厚，凋亡心肌细胞数有减少趋势，同时3种受体亚型基因表达均显著增加，但只有LPA1与LPA3蛋白表达增加，说明这两种受体亚型可能参与了晚期的心脏重塑过程[7]。这一研究结果在整体水平证明了我们在细胞水平显示的LPA2不参与心脏细胞的生长调节，LPA1和LPA3在心脏细胞的生长调节中起重要作用，与心脏重构密切相关。
3 总结
LPA是一种十分活跃的生物活性分子，具有广泛的生物学效应。在这些效应中，不同的受体亚型起了正向或负向的调节作用。心脏正常功能的维系依赖于各种心脏细胞生长(存活)与凋亡的平衡，不同的病理条件下这种平衡会打破。如果我们能进一步深入了解各受体亚型的功能、与它们耦联的G蛋白和信号通路，在LPA受体水平上加以诱导，使
生长和凋亡的平衡朝着人为需要的方向发展，将不失为一种新的疾病治疗策略。不断问世的LPA各种受体亚型的拮抗剂或激动剂，正义/反义RNA和miRNA技术的发展将使这些梦想实现。
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范文四：中药选择性雌激素受体调节剂
雌激素是女性体内关键性的调节激素。据研究，许多中药具有植物雌激素样作用，如川牛膝、红花、丹参、女贞子、枸杞等，又被称为“选择性雌激素受体调节剂”。雌激素是女性体内关键性的调节激素，不仅对女性生殖系统的生长、发育、分化有重要的调控作用，而且对骨骼系统、心血管系统、中枢神经系统的正常功能也有重要影响。女性进入绝经期后，随着卵巢功能的衰退和体内雌激素水平的下降，女性将出现更年期综合征，骨质疏松、心血管疾病、老年性痴呆等疾病的发病率也随之上升；而雌激素替代疗法虽然可明显缓解上述更年期症状，但长期应用雌激素易产生高血凝状态、高血压、水肿、痴呆等副作用，并增加乳腺癌及子宫内膜癌等妇科肿瘤的发病危险。因此，人们一直致力于寻求雌激素替代物，期望这种替代物既能发挥雌激素对心脑血管等系统的保护作用，缓解更年期综合症；同时又能避免上述副作用，植物雌激素正是其中的重要一类。植物雌激素是天然存在于一些植物中、具有雌激素效能的化合物。因与雌激素结构类似，这些化合物可以与体内雌激素受体结合并显示雌激素样活性。植物雌激素在体内具有双向调节作用：在体内雌激素水平较低时有拟雌激素作用；当体内雌激素水平较高时可发挥抗雌激素活性。因此，近年来植物雌激素又被称为“选择性雌激素受体调节剂”。长期以来，许多中草药植物被广泛应用于妇女保健和妇科病症的治疗，这些中药所含的植物雌激素在其中发挥的药效作用不容忽视。在含有植物雌激素成分的中药中，活血化瘀类和补益类中药居各类中药的前二位。
川牛膝? 川牛膝主要化学成分甾醇类化合物。其所含杯苋甾酮具有雌激素样作用，幼年大鼠服后予它重量增加，但对卵巢无明显影响。
红花? 红花中含有β-谷甾醇。去卵巢小鼠注射红花煎剂可使子宫重量明显增加,提示中药红花具有雌激素样作用。
丹参? 丹参主要成分为菲醌类化合物。实验取体重11～12g雌性幼龄小鼠，用3％淀粉糊将药物配成2％总丹参酮淀粉悬液灌胃给药每日1次，每次0．2mL，给药3d，第4天将小鼠断颈处死，取出子宫，结果给药组子宫重量明显高于对照组，而对于切除卵巢的小鼠则子宫增重不明显，说明丹参酮有较温和的通过卵巢起作用的雌激素活性。
女贞子? 女贞子主要化学成分为齐墩果酸、女贞子苷。经研究女贞子的有机溶剂提取物中，既有雄激素样物质，也有雌激素祥物质的存在，含睾丸酮428.31μg·-1，雌二醇139. 02μg·g-1。即同一药物具有双向调节作用。用女贞子等补肾阴的中药在小白鼠阴道粘膜上产生了雌激素样作用，服药组兔卵巢的大卵泡数明显增多，雌激素升高。
枸杞? 枸杞子主要成分为甜菜碱、胡萝卜苷、抗坏血酸、醇浆红素等。经研究表明：枸杞对下丘脑-垂体-性腺轴功能有一定影响，用枸杞每天2次按1mL·100g-1体重灌胃，共5d，第6天取材，结果可使正常大鼠垂体前叶、卵巢、子宫重量比对照组明显增重，卵巢HCG/LH受体特异结合力也明显提高，对去卵巢大鼠，使其垂体对注射LRH后LH分泌明显增加。另有实验证明，用枸杞水煮浓缩液给去卵巢大鼠灌胃5 周，结果显示枸杞有明显的降脂作用，同时可以减轻由于雌激素水平降低引起的子宫萎缩。
甘草? 甘草其主要化学成分是甘草甜素、甘草次酸。大剂量的甘草甜素能增强雌激素样作用。能抑制17-羟甾类脱氨酶转变雄甾烯二醇为睾酮的作用。由于上述酶的作用被抑制而造成3，17-羟基黄体酮的积聚，因此，甘草次酸具有抑制小鼠生殖腺产生睾丸酮的作用。
肉苁蓉? 肉苁蓉其主要化学成分为脂溶性成分：6-甲基吲哚等，水溶性成分N，N-二甲基甘氨酸甲酯、胡萝卜素等。肉苁蓉可增强下丘脑-垂体-卵巢的促黄体功能，能使大鼠垂体前叶、卵巢、子宫重量比对照组明显增重，提高垂体对LRH 的反应性及卵巢的促黄体功能。
淫羊藿? 淫羊藿主要成分为黄酮苷。实验研究表明，淫羊藿煮提液按1mL·100g-1体重给药雌性大鼠，5d后测定能提高垂体对LRH和LH的反应性。明显增加正常大鼠垂体前叶、卵巢、子宫重量，对去卵巢大鼠，给药90min时，垂体对注射LRH后的LH分泌，约为对照组的5倍。
补骨脂? 补骨脂其主要化学成分为香豆素衍生物、黄酮类、挥发油。实验研究表明，补骨脂干粉给予成年正常的切除卵巢的雌鼠，能增加阴道角化。补骨脂粉对去卵巢雌鼠可引起动情周期变化，使于它重量明显增加，有较强的雌激素样作用。
菟丝子? 菟丝子主要化学成分为醇类、黄酮类。实验研究表明菟丝子具有增强下丘脑-垂体-卵巢促黄体功能，其作用方式为提高垂体对LRH的反应性及卵巢对LH的反应性。
(责任编辑：流星)
范文五：受体调节与药物效应
受体调节与药物效应受体的调节
细胞膜上的受体数目或反应性受周围生物活性物质如神经递质、激素或药物的调节。一般来说，受体数目的变化与其周围生物活性物质的浓度或作用之间呈负相关。受体周围的生物活性物质浓度高或长期应用受体激动剂时，可使相应受体数目减少，敏感性降低称为向下调节（down regulation），表现为该受体对激动剂的敏
感性降低，出
现脱敏或耐
受现象。如反
复应用β -
受体激动药
用于治疗哮
喘。这是药效
降低，对药物
产生耐受性
的原因之一。
受体长期受
阻断剂作用
时可使其数
目增加，敏感性增加称为向上调节(up regulation)，表现为该受体对该生物活性物质的敏感性增高，出现超敏或高敏性，这是造成某些药物突然停药出现反跳现象的原因。例如长期应用β受体阻断药，可使β受体向上调节；一旦突然停药，因β受体数目增多而对体内的递质去甲肾上腺素产生强烈反应，可引起心动过速、心律失常或心肌梗死。
内源性配体对药效学的影响
在应用涉及内源性配体的受体阻断药时，必须考虑内源性配体的浓度。在确认内源性配体浓度过高时可适当加大拮抗药的用量，而在病情好转、内源性配体浓度有所减低后，阻断药的剂量也应随之减少。
在应用拟似内源性配体作用的
受体激动药时，应注意药物除作用于突触后膜受体而发挥作用外，又可同时作用于突触前膜受体而减少内源性配体的释放。这种负反馈调节在连续用药时可能导致药物疗效的降低。例如应用左旋多巴治疗帕金森病时，由于其可抑制多巴胺能神经减少内源性多巴胺的释放，故用药一段时间药物疗效反而降低。
范文六：β肾上腺素受体对心脏活动调节的影响
β肾上腺素受体对心脏活动调节的影响摘要：现研究已发现九种肾上腺素受体亚型：α1A、α1B、α1D、α2A、α2B、β1、β2、β3、β4。β肾上腺素受体（β-adrenoceptor，βAR）介导儿茶酚胺类物质的生理作用。各亚型对心脏活动调节具有不同的影响。
关键词：β肾上腺素受体、信号通路、偶联蛋白、cAMP、cGMP、
一、β1-AR、β-2AR、β-3AR相关信号通路
交感神经对心血管功能的调节是通过儿茶酚胺作用于心肌细胞膜上肾上腺素受体得以实现的，在心肌细胞上存在β1-AR、β-2AR、β-3AR，他们对心肌细胞的存活所起的作用不同。心脏β1受体激活后与Gs蛋白偶联，通过激活细胞膜上的AC使细胞内cAMP水平升高，Ca内流增加，心肌收缩力增强。以往认为心脏β2受体与β1受体同样是与Gs蛋白偶联的，通过Gs-AC-cAMP信号途径介导心肌正性变力效应，近来研究发现β2受体同时与Gs、Gi蛋白相偶联，Gi通路对Gs通路信号向细胞内的转导发挥屏蔽作用，而使β2受体信号转导具有空间局限性，提示了功能性cAMP局域化和由β2受体偶联Gi信号转导通路的存在。β3受体可介导负性肌力作用，其负性肌力作用能够被百日咳毒素、NO的非特异性阻断剂甲基蓝及以NOS的抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯等阻断，NOS的底物L-精氨酸可逆转阻断剂的作用。此外，β3受体激动剂的负性变力效应与NO、cGMP的产生相平行，表明β3受体的信号通路可能是通过Gi-NO-cGMP通路转导。
二、心脏发生病理变化时β肾上腺素能信号转导系统改变的机理
心脏处于正常生理状态时，β-1AR的正性变时变力作用起主导作用，β-2AR、β-3AR的作用甚微，但当心脏发生病理变化（如心肌梗死、心衰）或老化时，交感神经激活，最普遍的受体异常是β1受体下调，还存在β2、β3受体上调。β1受体下调的机制目前认为主要与衰竭心肌受体蛋白在转录水平发生障碍有关，因发现多种心衰动物和人心肌细胞内β1受体mRNA水平降低。与β1受体不同，β2受体不存在下调。正常情况下心脏β3受体含量相对较少，衰竭心肌β3受体并不下调反而含量明显增多，其机制尚不清楚。可能是由于β-3AR胞内第三环和C端缺乏PKA和βARK的磷酸化位点，使得β-3AR可抵制激动剂短期刺激作用导致的脱敏，或抵制激动剂长期刺激导致的下调。此外，激活β-3AR所需儿茶酚胺的浓度高于激活β-1AR、β-2AR所需的浓度；也可能β3受体含量增加仅仅是心室受损的结果。 心肌细胞的主要信号转导通路之一是AC-cAMP路径，其中cAMP与cGMP在心脏发挥着相反的功能作用，cAMP与心脏功能正相关，cGMP与心脏功能负相关。相关研究表明病变心肌的细胞膜AC活性在基础状态下及鸟苷酸刺激下均降低，cAMP净生成减少约40%。cGMP可激活促进cAMP降解的磷酸二酯酶，使cAMP水平更加下降而增加负性肌力作用。因此，衰竭心肌通过β1受体下调使cAMP正性肌力效应明显减弱。目前认为cAMP下降可能有两方面作用：一是心肌收缩力下降，使衰竭心肌功能进一步恶化，二是降低处于能量饥饿状态的心肌能量消耗，保存心肌细胞活力，可能有助于延缓心衰恶化。心肌内cAMP升高可致正性频率和正性肌力作用，儿茶酚胺的正性肌力和频率增加作用是由心肌细胞中的β1和β2受体介导的，而β3受体的作用与其相反。在人的心室肌，β3受体与Gi蛋白相偶联，刺激NOS，导致NO产生，细胞内cGMP增加，心肌收缩力降低，衰竭心脏产生的正性肌力作用比非衰竭心脏减少75%。动物实验表明β3受体激动剂BRL-37344可使豚鼠左室压、钙离子流均降低，同时发现NOS抑制剂L-N-AME可减弱BRL-37344负性肌力作用，提示β3受体产生的负性肌力作用，部分通过钙离子流下降，部分通过NO依赖途径实现的。
此外，心脏病变时亦存在β受体与Gs蛋白脱偶联，β1和β2受体都可发生脱偶联现象，β3受体不包含β受体激酶磷酸化位点，还缺少PKA调节磷酸化的序列，缺乏象β1/β2受体那样激动剂诱导快速减敏的化学结构，它的激活需要比β、β2受体激活浓度更高的儿茶酚
胺量。因此β3受体不易发生脱敏功能活性不会减退。β3受体与Gi蛋白偶联，心衰时β3受体含量增加，也许可以在某些程度上揭示Gi蛋白的增加。二者的偶联刺激NOS，导致NO产生，细胞内cGMP增加，使心肌收缩力降低。综上所述，心脏病理改变后，β受体及相关信号转到通路存在明显改变，主要表现为β1受体mRNA和cAMP生成减少，β3受体上调，NOS活性增加和cGMP生成增多，β2受体表达无改变。
三、展望
心脏病理变化的发生发展过程中，β-1AR、β-2AR、β-3AR发生改变的相关性有待进一步研究。目前研究较多的是β1、β2受体。交感神经系统的长期过度激活，β1、β2受体介导的调节反应消失早，而β3受体接到的反应可持续存在于心脏病理改变进展中，β3受体所接到的负性肌力作用同β1受体脱敏和β2受体脱偶联相互协调，发挥作用。随着病理改变程度的不同，3种β受体亚型的表达呈现不同的变化趋势。程度越重，β1受体减少程度越大，β2受体表达在不同程度CHF心肌中无明显差异，β3受体基因表达增多。
在心脏病变早期，β1受体下调、β2、β3受体上调，而晚期，与β1受体和β2受体相比，β3受体易被儿茶酚胺激活且不易脱敏，再加上β3受体和Gi上调，而β1和β2受体的反应性减弱，此时β3受体接到的负性变力作用会进一步加重心室收缩功能异常，最终导致进行性恶化。此研究将对心脏疾病的临床诊疗具有指导性意义。
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范文七：可溶性内皮细胞蛋白C受体和可溶性血栓调节蛋白在2 型糖尿病诊疗中的临床意义
可溶性内皮细胞蛋白C受体和可溶性血栓调节蛋白在2 型糖尿病诊疗中的临床意义 可溶性内皮细胞蛋白C受体和可溶性血栓调节蛋白在2 型糖尿病诊疗中的临床意义钱定良，闫绍荣，刘凌云
（xxx人民医院检验科，浙江 瑞安 325200）
摘要：目的 探讨血管内皮损伤在2型糖尿病（DM）患者微血管并发症发生、发展中的临床意义。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定150例2型DM患者和150名体检正常者（正常对照组）血浆可溶性内皮细胞蛋白C受体（sEPCR）和可溶性血栓调节蛋白（sTM）水平。结果 与正常对照组相比，DM患者血浆sEPCR和sTM水平均显著升高（P＜0.05）。结论 血浆sEPCR和sTM水平升高与DM患者血管病变的发生和严重程度密切相关，是反映血管内皮细胞功能的良好指标。
关键词：可溶性内皮细胞蛋白C 受体；可溶性血栓调节蛋白；2型糖尿病
血管并发症是糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者的主要并发症，是致残、致死的主要原因，也是影响其预后的主要因素。DM患者血管病变的机制十分复杂，其中内皮功能损伤起着关键的作用[1]。有研究发现，血管内皮细胞可合成和分泌可溶性内皮细胞蛋白C受体（soluble endothelial protein C receptor，sEPCR）和可溶性血栓调节蛋白（soluble thrombomodulin，sTM），血浆中sEPCR和sTM水平的变化，在一定程度上反映了DM 患者血管内皮的损伤情况[2]。本研究测定了150例2型DM 患者和150名体检正常者血浆sEPCR和sTM 水平，探讨血管内皮损伤在DM患者微血管并发症发生、发展中的临床意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象
DM组：由xxx人民医院按世界卫生组织DM诊断标准确诊的DM患者150例，其中男83例、女67例，年龄49～75岁。正常对照组：在xxx人民医院体检正常者150名，其中男85名、女65名，年龄45～55岁，空腹血糖＜6.1 mmol/L，按世界卫生组织标准确定无DM及其他心、肝、肾功能异常和内分泌代谢疾病。
1.2 方法
1.2.1 样本采集 采集所有对象空腹静脉血5 mL，以肝素抗凝，4 ℃离心分离血浆。血浆sEPCR和sTM检测均采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA ）。
1.2.2 仪器 SpectraMax M2型酶标仪为美国Molecular Devices公司产品，血浆sEPCR和sTM检测试剂盒购于上海太阳生物技术有限公司。血糖采用Abbott ARCHITECT c16000型全自动生化分析仪及原装试剂（美国Abbott公司）测定。
1.3 统计学方法
采用SPSS 10.0软件进行数据统计。检测指标以
表示，组间比较用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
与正常对照组比较，DM组血浆sEPCR及sTM水平均明显升高（P＜0.05）。见表1。
表1 DM组和正常对照组血浆sEPCR及sTM的检测结果（μg/L）
注：与正常对照组比较，*P＜0.05
组别 例数 sEPCR sTM DM组 150 147.32±51.25* 29.95 ±8.91*正常对照组 150 116.92±19.93 18.99 ±2.89
3 讨论
sEPCR和sTM均由血管内皮细胞分泌产生，是蛋白C系统的主要成分，共同参与激活蛋白C系统。 以往对sEPCR和sTM的研究主要集中在凝血和纤溶作用中，近年国内外多项研究表明血浆sEPCR和sTM检测可作为血管内皮损伤敏感和特异的分子标志物[3]。
内皮细胞蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）是近年发现的蛋白C系统的一个新成员，免疫组织化学显示其主要定位于大血管内皮细胞上。克隆的EPCR cDNA长为13 kb，是一个由221个氨基酸组成的跨膜糖蛋白，配体主要与细胞外的决定簇结合。细胞表现EPCR可与蛋白C和活化的蛋白C特异性结合，进一步使蛋白C活化，并增强凝血酶-血栓调节蛋白复合物活化蛋白C。蛋白C在蛋白S、膜磷脂、V 因子及钙离子等辅因子参与下，灭活FVa和Ⅷa，从而抑制凝血功能[4]。
血栓调节蛋白（throm bomodulin，TM）也是一种跨膜糖蛋白，可与循环凝血酶特异性连接，参与蛋白C的活化和凝血。TM主要表达在血管内皮细胞上，以微循环表达，密度相对更高，肾小球微循环TM表达甚高。血浆sTM 为细胞膜表现TM，细胞外决定簇的蛋白分解产物。血管内皮细胞损伤时，TM大量产生并被释放到循环血液中，其血浆水平升高可敏感反映各种疾病下的血管内皮细胞的损伤，尤其是微血管病变[4]。
本研究发现，DM患者血浆sEPCR和sTM水平均高于正常对照组，此结果与廖国玲等[5]的结果相同。说明2型DM患者存在血管内皮损伤或功能紊乱，而血浆sEPCR和sTM水平增加的同时，亦增加了微血栓形成的可能，加剧血管内皮细胞的损伤，形成恶性循环。血浆sEPCR和sTM含量的增加在DM及其并发症的发生、发展中发挥了重要作用。因此，血浆sEPCR和sTM水平可能是2型DM血管并发症的早期预测指标，可为尽早发现血管内皮损伤和DM血管并发症提供参考。
参考文献：
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Soluble endothelial protein C receptor and soluble thrombomodulin in patients with type 2 diabetes mellitus
QIAN Dingliang，YAN Shaorong，LIU Lingyun.
（Department of Clinical Laboratory，Ruian People"s Hospital，Ruian325200，Zhejiang，China）
Abstract：Objective To investigate the role of vascular endothelial injury in the development of microvascular complications in type 2 diabetes mellitus（DM）patients. Methods Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） was used to determine for soluble endothelial protein C receptor（sEPCR） and soluble thrombomodulin（sTM） levels in 150 type 2 DM patients and 150 healthy subjects（healthy control group）. Results Compared with healthy control group，the levels of sEPCR and sTM in DM patients increased（P＜0.05）. Conclusions The levels of sEPCR and sTM have correlations with the occurrence and severity of vessel diseases in DM patients，which can be biomarkers for evaluating endothelial function.
Key words：Soluble endothelial protein C receptor；Soluble thrombomodulin；Type 2 diabetes mellitus
文章编号：1673-8640（2017）03-0208-02
中图分类号：R446.1
文献标志码：A
DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2017.03.012
（收稿日期：2016-10-17）
（本文编辑：范基农）
作者简介：钱定良，男，1966年生，副主任技师，主要从事临床检验工作。
范文八：白三烯受体调节剂治疗支气管扩张症的疗效观察]@]@]
@白三烯受体调节剂治疗支气管扩张症的疗效观察
[摘要] 目的 观察口服白三烯受体调节剂孟鲁司特治疗支气管扩张症的临床疗效。 方法 将60例支气管扩张症患者随机分为对照组和治疗组各30例。对照组仅用常规治疗，治疗组在常规治疗的基础上加用孟鲁司特10 mg，每天1次，疗程3个月。比较两组相关疗效参数变化。 结果 治疗组总有效率为93.33%，对照组总有效率为73.33%，两组比较差异有统计学意义（p 0.05），具有可比性。
1.2 治疗方法
对照组仅用常规治疗，包括吸氧、止咳化痰药物、抗感染治疗，以及对症和支持治疗。治疗组在常规治疗的基础上加用孟鲁司特10 mg，每天1次，疗程为3个月。
1.3 观察指标
记录患者治疗前和治疗3个月结束时的每日痰量变化、肺功能变化、血常规和胸部ct结果，以及治疗3个月急性加重致住院次数。肺功能的指标包括：用力肺活量（fvc）、第1秒用力呼气容积（fev1）、fev1/fvc的百分比。比较两组相关参数的变化。
1.4 疗效判定标准
显效：咳嗽、咳脓痰和肺部啰音基本消失，热退，白细胞总数及中性粒细胞分类恢复正常，胸部ct示炎性病灶吸收。有效：上述症状明显减轻，肺部啰音明显减少，胸部ct示炎性病灶部分吸收。无效：仍有大量脓痰，肺部啰音无明显减少，体温无明显下降，胸
范文九：细胞内模式识别受体NOD2信号转导及其调节_刘彤云
?２８?文章编号：１０００－１３３６（２００７）０１－００２８－０３
《生命的化学》２００７年２７卷１期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００７，２７（１）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
细胞内模式识别受体ＮＯＤ２信号转导及其调节
刘彤云陈志强
（中国医学科学院＆协和医科大学皮肤病研究所，
南京２１００４２）
摘要：近年新发现的ＮＯＤ２被证实是一细胞内模式识别受体，广泛参与宿主对病原体的多种免疫和炎症应答。
与Ｔｏｌｌ样受体一样，它在调节天然免疫和获得性免疫方面具有重要意义，是联系天然免疫与特异性免疫的重要桥梁。该文着重介绍ＮＯＤ２识别的配体及其方式、ＮＯＤ２信号转导通路及其调节机制方面的有关进展。关键词：
ＮＯＤ２；模式识别受体；信号转导
中图分类号：Ｒ３９２．１
ＮＯＤ２蛋白是一新发现的细胞内病原相关模
式识别受体，即核苷酸结合寡聚化结构域（ｎｕ－ｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｄｏｍａｉｎ，ＮＯＤ）蛋白家族中的一员。研究表明ＮＯＤ２能识别存在于革
兰氏阴性和阳性细菌细胞壁的胞壁酸二肽（ＭＤＰ），从而广泛参与细胞内病原微生物的识别和炎症应答的诱导，是联系天然免疫与特异性免疫的重要桥梁［１，２］。
（ＭＤＰ），一种存在于所有革兰氏阴性和阳性细胞细胞壁内的具有生物活性的最小肽聚糖模体（ｍｏ－
ｔｉｆ）。ＮＯＤ２通过其ＬＲＲ结构域识别ＭＤＰ－ＬＤ，且只能识别ＭＤＰ－ＬＤ而不能识别其异构体ＭＤＰ－ＬＬ、ＭＤＰ－ＤＤ［４，５］。关于ＬＲＲ与ＭＤＰ相互作用具体方
式目前仍不清楚，推测可能通过诱发一种复杂的构象变化而引起ＮＯＤ２的活化。不过研究证实，Ｃ端ＬＲＲ结构域内的不同氨基酸残基构成的β链／β卷曲（βｓｔｒａｎｄ／βｔｕｒｎ）对于ＭＤＰ的反应是必需的［６］。
有关ＭＤＰ如何进入细胞内，以及它与ＮＯＤ２的结合及识别方式目前也不十分清楚。但Ｖａｖｒｉｃｋａ等［７］发现，在结肠上皮细胞，ＭＤＰ－ＬＤ可被一种二肽／三肽载体ｈＰｅｐＴ１摄取转运，同时它可竞争性抑制ｈＰｅｐＴ１底物甘氨酰甲基甘氨酸（ｇｌｙｃｙｌｓａｒ－
１．ＮＯＤ２受体的编码基因及结构［２，３］
ＮＯＤ２蛋白由位于１６ｑ１２的编码基因（ＮＯＤ２／
ＣＡＲＤ１）所编码，由３个不同的功能结构域组成：２个Ｎ端胱天蛋白酶（ｃａｓｐａｓｅ）募集区域（ＣＡＲＤ）（位于氨基酸残基２８～２２０处），一个核苷酸结合域（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｄｏｍａｉｎ，ＮＯＤ／ＮＢＤ）（位于氨基酸残基２７３～５７７处）和Ｃ端由１０个相连的富含亮氨酸的重复序列（ＬＲＲ）（位于氨基酸残基７４４～１０２０处）组成。ＬＲＲ区域因含α螺旋及β折叠而形成马蹄形结构。ＣＡＲＤ域是一个蛋
白质–蛋白质相互作用的区域，可以与具有该模体（ｍｏｔｉｆ）的其他分子发生同源性相互作用，其完整性对于ＮＯＤ２介导的核因子－κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－
κＢ，ＮＦ－κＢ）活化是必需的。ＮＯＤ域介导ＮＯＤ蛋白的寡聚化。与ＴＬＲ相似，ＬＲＲ域涉及配体识别（ｌｉｇａｎｄｓｅｎｓｉｎｇ）。如果缺乏ＬＲＲ域，则ＮＯＤ２对
细菌配体无应答。
ｃｏｓｉｎｅ）的摄取。而ｓｉＲＮＡ可减少ｈＰｅｐＴ１的表达，从而抑制甘氨酰甲基甘氨酸和ＭＤＰ的摄取。这提示在结肠上皮细胞，ｈＰｅｐＴ１可能是ＭＤＰ的转运载体。Ｂａｒｎｉｃｈ等［８］进一步研究显示，在肠上皮细胞，ＭＤＰ－ＬＤ转运通过细胞膜后，ＮＯＤ２识别ＭＤＰ－ＬＤ需要细胞膜定位。ＮＯＤ２的膜靶向定位（ｍｅｍｂｒａｎｅｔａｒｇｅｔｉｎｇｏｆＮＯＤ２）对于ＭＤＰ诱导的ＮＦ－ｋＢ活化是必需的。ＮＯＤ２的膜靶向定位及随后的ＮＦ－ｋＢ活化由ＮＯＤ２Ｃ端的２个亮氨酸残基
和一含色氨酸的模体所介导。
２．ＮＯＤ２识别的配体和方式
现已证实，ＮＯＤ２识别的配体是胞壁酰二肽
———————————
收稿日期：作者简介：
３．ＮＯＤ２／ＲＩＰ２信号转导通路
正常情况下，ＮＯＤ／ＮＬＲ蛋白以一种无活性
的、自我抑制的形式存在于胞质。当ＮＯＤ２蛋白
２００６－１０－２５
刘彤云（１９７３—），
男，
博士生，
Ｅ－ｍａｉｌ：
ｔｏｎｇｙｕｎ７３１＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ；陈志强（１９５６—），男，教授，博士生
导师，联系作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｒｚｑｃｈｅｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
ＬＲＲ域识别细菌产物（ＭＤＰ）后可诱导自身寡聚化，募集受体相互作用蛋白－２（ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ－２，ＲＩＰ２。也称为ＲＩＣＫ或ＣＡＲＤＩＡＫ，一种含ＣＡＲＤ结构的蛋白激酶，是多种信号转导通
●新进展
《生命的化学》２００７年２７卷１期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００７，２７（１）
?２９?
路共同的下游信号分子）。ＮＯＤ２可通过嗜同种
ＣＡＲＤ－ＣＡＲＤ相互作用（ｈｏｍｏｐｈｉｌｉｃＣＡＲＤ－ＣＡＲＤ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）与ＲＩＰ２／ＲＩＣＫ直接作用，引起ＲＩＣＫ活化。继而位于ＲＩＰ２ＣＡＲＤ域与激酶域之间的中央区域与ＩＫＫγ（也称ＮＥＭＯ）发生联系，而使后者发生泛素化（ＩＫＫ激酶复合体是由２个催化亚单位ＩＫＫα和ＩＫＫβ及另一调节亚单位ＩＫＫγ组成的ＩκＢ激酶复合体）。继而ＩＫＫβ发生磷酸化，从而激活ＮＦ－κＢ［９￣１２］。研究证实缺乏ＲＩＰ２的胚胎成纤维细胞，ＮＯＤ的配体不能诱导ＮＦ－κＢ的活化，但增加ＲＩＰ２的表达载体后能恢复其诱导作用。这说明在这一过程中，ＲＩＰ２对于ＮＯＤ２诱导的ＮＦ－κＢ活化是必需的［１０，１２］。研究提示，ＲＩＰ２可能通过活化Ｋ６３Ｅ３泛素连接酶（Ｋ６３Ｅ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅ）或抑制Ｋ６３去泛素化酶来使ＩＫＫγ发生泛素化，而不
需其本身的激酶活性发挥作用［１１］。
近来，Ｐａｎ等［１３］发现，
同时，ＮＯＤ２的抗微生物活性也依赖ＲＲＩＭ－１９的存在，提示ＧＲＩＭ－１９是ＮＯＤ２介导的黏膜天然免疫应答的重要组成成分。
ＮＦ－κＢ诱导激酶
（ＮＦ－κＢ－ｉｎｄｕｃｉｎｇｋｉｎａｓｅ，ＮＩＫ）可以与野生型、突变型或不含ＣＡＲＤ域的ＮＯＤ２结合，随后通过ＩκＢ激酶α（Ｉκ，ＩＫＫ１）将Ｐ１００加工为Ｐ５２并Ｂｋｉｎａｓｅα转移入核，从而介导ＮＯＤ２激动剂ＭＤＰ诱导的
ＮＦ－κＢ活化。说明ＮＯＤ２可以利用ＣＡＲＤ域依
赖（通过ＲＩＰ２）或非依赖（通过ＮＩＫ）的相互作用，通过经典和非经典的ＮＦ－κＢ活化途径传递活化
信号。
因此可以推测，ＭＤＰ转运通过细胞膜后，
ＮＯＤ２通过膜靶向定位与之结合，ＮＯＤ域发生自身寡聚化，募集ＲＩＰ２／ＲＩＣＫ，诱导ＮＦ－ｋＢ的活化
从而传递活化信号。
４．ＮＯＤ２信号通路的调节机制
目前关于ＮＯＤ２信号通路的调节机制尚不清
楚。不过，近来有较多的研究者在关注ＮＯＤ２信号通路的调节，鉴定出了几个新的ＮＯＤ２信号调节蛋白和内源性的转录剪接异构体。Ｃｈｅｎ等［１４］证实，促分裂原活化蛋白激酶激酶ＴＡＫ１（ｔｒａｎｓ－
ｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ）能够与ＮＯＤ２相互作用，认为它是ＮＯＤ２介导ＮＦ－κＢ活化所必需的。后来，Ｂａｒｎｉｃｈ等［１５］也发现了一个ＮＯＤ２的相互作用蛋白ＧＲＩＭ－１９，它与ＮＯＤ２在
胞质中共区域化，而且二者的结合是特异性的。
ＧＲＩＭ－１９对于经ＭＤＰ－ＬＤ刺激ＮＯＤ２介导的ＮＦ－κＢ活化也是必需的；在过表达ＮＯＤ２的ＨＥＫ２９３细胞中，使用特异性ｓｉＲＮＡ干扰减少ＧＲＩＭ－１９的表达，减少了ＭＤＰ－ＬＤ诱导的ＮＦ－κＢ活化。
Ｗｅｉｃｈａｒｔ等［１６］发现，在ＴＨＰ－１细胞，ＭＤＰ－
ＬＤ刺激导致了ＰＤＸ４持久转录和蛋白质表达的上调，而其异构体ＭＤＰ－ＤＤ（不能被ＮＯＤ２识别）刺激则无应答。同时，在稳定的基因纯化的ＨＥＫ细胞，ＰＤＸ４基因剔除导致ＭＤＰ诱导的ＮＦ－ｋＢ转录活化明显增强；从而认为ＮＯＤ２介导的ＰＤＸ４可能是ＮＯＤ２诱导ＮＦ－κＢ活化下游负反馈环路的组成部分。ＭｃＤｏｎａｌｄ等［１７］筛选出ＮＯＤ２的一个新的负性调节蛋白Ｅｒｂｉｎ，能与ＮＯＤ２特异性结合，并抑制ＭＤＰ刺激诱导的ＮＯＤ２依赖的ＮＦ－κＢ活化。研究表明，ＮＯＤ２通过其ＣＡＲＤ结构域与Ｅｒｂｉｎ相互作用；而Ｅｒｂｉｎ通过其Ｃ端的一个区域阻断了ＭＤＰ识别后ＮＯＤ２下游的信号传递及随后的前炎症细胞因子的产生。这一结果已被Ｋｕｆｅｒ等［１８］证实，他们发现Ｅｒｂｉｎ的异位表达或基因剔除可以负相调节ＮＯＤ２介导的ＮＦ－κＢ活化。同时也发现二者在病原进入部位共区域化；而且Ｅｒｂｉｎ不能与不能被ＭＤＰ活化的ＮＯＤ２突变体结合，但与活化的ＮＯＤ２却具有更强的亲和力。最近，Ｙａ－ｍａｍｏｔｏ－Ｆｕｒｕｓｈｏ等［１９］又发现ＡＤＰ核糖基化因子家族的一个成员，ＧＴＰ激酶活化蛋白Ｃｅｎｔａｕｒｉｎ－Ｂｅｔａ１（ＣＥＮＴβ１）与ＮＯＤ２在胞质中共区域化并能发生特异性结合，下调ＮＯＤ２依赖的ＮＦ－κＢ活化。
此外，Ｒｏｓｅｎｓｔｉｅｌ等［２０］鉴定出一个内源性的ＮＯＤ２抑制物ＮＯＤ２－Ｓ，它由ＮＯＤ２的转录剪接异构体（缺乏第３个外显子）编码的一个截短的ＮＯＤ２蛋白异构体（含有一个完整的ＣＡＲＤ１结构域和截短的由５４个氨基酸残基组成的ＣＡＲＤ２结构域）。ＮＯＤ２－Ｓ可与ＲＩＰ２和ＮＯＤ２的ＣＡＲＤ结构域相互作用，从而抑制ＮＯＤ２／ＲＩＰ２诱导的ＮＦ－κＢ活化和前炎症细胞因子ＩＬ－８的表达和分泌，以及ＮＯＤ２／ＲＩＰ２依赖的ＩＬ－１β的成熟。Ｌｅｕｎｇ等［２１］也证实，ＮＯＤ２ＲＮＡ可以通过多种形式进行选择性剪接；并证实，短ＮＯＤ２和ＮＯＤ－１９０（与ＮＯＤ２－Ｓ相似的一种异构体）无活性且对ＭＤＰ无应答；同时发现，它们不能拮抗野生型ＮＯＤ２的活性（与Ｒｏｓｅｎｓｔｉｅｌ等的实验结果存在差异，可能与实验方法的不同有关）。说明ＮＯＤ２转录产物的选择性剪
接，可能是改变或下调识别细菌的细胞内受体
ＮＯＤ２活性的一种潜在机制。
尽管上述调节蛋白与ＮＯＤ２结合后可影响其
?３０?
文章编号：１０００－１３３６（２００７）０１－００３０－０４
《生命的化学》２００７年２７卷１期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００７，２７（１）
●ＭｉｎｉＲｅｖｉｅｗｓ
内脏脂肪素，一种新发现的肽类激素
黄
琳陆付耳陈
广
武汉４３００３０）
（华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，
摘要：内脏脂肪素（ｖｉｓｆａｔｉｎ），即：前Ｂ细胞集落增强因子（ｐｒｅ－Ｂｃｅｌｌｃｏｌｏｎｙ－ｅｎｈａｎｃｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＢＥＦ），是一种新
发现的具有结合并激活胰岛素受体、模拟胰岛素作用的肽类激素。首先在内脏脂肪中发现，在骨髓、肝脏、肌肉等多种组织中均有表达，并具有组织特异性。内脏脂肪素具有多种生物学活性，如降血糖、模拟胰岛素样作用、增加胰岛素敏感性、参与炎症应答、延缓中性粒细胞凋亡、调节脂代谢和自分泌、旁分泌、内分泌等作用。目前内脏脂肪素在机体内的具体作用机制尚不十分清楚，但其发现可能为研究相关疾病的发病机制及治疗提供新的思路。关键词：
内脏脂肪素；
ＰＢＥＦ；脂肪组织；糖尿病
中图分类号：Ｒ５４０．４
过去的１０年间，从无活性的脂肪储存库到有
活性的内分泌器官，人们对脂肪组织的认识发生了变革性的转变。脂肪组织被认为是体内最大的内分泌器官，可以分泌大量的细胞因子，这些细胞因子发出信号并能对外界信号产生反应，从而
———————————
收稿日期：作者简介：
调节食欲、能量消耗、胰岛素敏感性、内分泌和生殖系统、骨代谢、炎症和免疫应答。脂肪细胞作为内分泌细胞，分泌大量有生物活性的脂肪细胞因子，包括抗胰岛素蛋白（ｒｅｓｉｓｔｉｎ）、瘦蛋白、脂联激素（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）及内脏脂（ｌｅｐｔｉｎ）、ＴＮＦ－α
肪素（ｖｉｓｆａｔｉｎ）等。以下介绍内脏脂肪素的分布和生物学功能等方面的研究进展。
２００６－１０－０９
黄琳（１９８２—），女，硕士生，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｌｉｎ－陆付耳（１９６１—），男，
教授、医学博士、主任医
陈广（１９７９—），
ｓｋｙ＠１２６．ｃｏｍ；
师、博士生导师，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｅｌｕ＠ｔｊｈ．ｔｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；男，博士生，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕａｎｇｃｈｅｎ８０８６＠１２６．ｃｏｍ
１．内脏脂肪素的分布
内脏脂肪素是最近发现的一种新的脂肪细胞
因子，首先在内脏脂肪组织中表达，与先前在淋
信号转导，但它们与ＮＯＤ２相互作用的确切分子机制仍不十分清楚。内源性的ＮＯＤ２的转录剪接。异构体在体内外的功能和生理作用也仍有待于进一步研究。
［３］［４］［５］［６］［７］［８］［９］
ＯｇｕｒａＹｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００１，２７６（７）：４８１２－４８１８ＩｎｏｈａｒａＮｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００３，２７８（８）：５５０９－５５１２ＧｉｒａｒｄｉｎＳＥｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００３，２７８（１１）：８８６９－８８７２ＴａｎａｂｅＴｅｔａｌ．ＥＭＢＯＪ，２００４，２３（７）：１５８７－１５９７
ＶａｖｒｉｃｋａＳＲｅｔａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００４，１２７（５）：１４０１－１４０９ＢａｒｎｉｃｈＮｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００５，１７０（１）：２１－２６ＭａｒｔｉｎｏｎＦｅｔａｌ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００５，２６：４４７－４５４
５．结语
通过近年来的研究已发现，作为细胞内的模
式识别受体，ＮＯＤ２在调节天然免疫和获得性免疫方面与Ｔｏｌｌ样受体一样具有重要意义。因此，进一步探讨ＮＯＤ２活化调节的分子机制和鉴定其他调节蛋白将有助于增进我们对ＮＯＤ２信号通路的了解，从而明确ＮＯＤ２信号改变在病原微生物感染、炎症以及疾病中的作用，以便更好地制定相应的治疗策略。
参
［１］［２］
［１０］ＩｎｏｈａｒａＮｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０００，２７５（３６）：２７８２３－２７８３１［１１］ＡｂｂｏｔｔＤＷｅｔａｌ．ＣｕｒｒＢｉｏｌ，２００４，１４（２４）：２２１７－２２２７［１２］ＭｅｙｌａｎＥｅｔａｌ．ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍＳｃｉ，２００５，３０：１５１－１５９［１３］ＰａｎＱｅｔａｌ．ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ，２００６，７４（４）：２１２１－２１２７［１４］ＣｈｅｎＣＭｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００４，２７９（２４）：２５８７６－２５８８２［１５］ＢａｒｎｉｃｈＮｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００５，２８０（１９）：１９０２１－１９０２６［１６］ＷｅｉｃｈａｒｔＤｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００６，２８１（４）：２３８０－２３８９［１７］ＭｃＤｏｎａｌｄＣｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００５，２８０（４８）：４０３０１－４０３０９［１８］ＫｕｆｅｒＴＡｅｔａｌ．ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ，２００６，７４（６）：３１１５－３１２４［１９］Ｙａｍａｍｏｔｏ－ＦｕｒｕｓｈｏＪＫｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００６，２８１（４７）：
考文献
３６０６０－３６０７０
［２０］ＲｏｓｅｎｓｔｉｅｌＰｅｔａｌ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００６，１０３（９）：
３２８０－３２８５
［２１］ＬｅｕｎｇＥｅｔａｌ．ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，２００７，４４（４）：２８４－２９４
ＫａｍｂｅＮｅｔａｌ．ＪＤｅｒｍａｔｏｌＳｃｉ，２００５，３９（２）：７１－８０ＩｎｏｈａｒａＮｅｔａｌ．ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ，２００５，７４：３５５－３８３
范文十：免疫细胞死亡受体的信号传导途径及其调节
?519??述评?
免疫细胞死亡受体的信号传导途径及其调节
郑德先
(中国医学科学院基础医学研究所,中国协和医科大学基础医学院,医学分子生物学国家重点实验室,北京100005)
中国图书分类号 R742 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2003)0820519205
死亡受体(DeathReceptor)是肿瘤坏死因子受体(TNFR,TumorNecrosisFactorReceptor)基因超家族的成员,具有富含Cys的胞外结构域和胞内死亡结构域(DD,DeathDomain)。死亡结构域具有诱导细胞凋亡的功能,有时也可抑制细胞凋亡或介导其它生物学功能。死亡受体包括:CD95(也称Fas或
1,2
Apol)、TNFR1(也称p55或CD120a)、DR3(Death34Receptor3)(Apo3,WSL21,TRAMP,LARD)、DR4
1
分析表明,每个CD95L三聚体分子可结合3个CD95分子
2
。核磁共振结构分析和突变研究提示,其死
亡结构域可与另1个结构域结合而导致死亡结构域
聚集。FADD(Fas2associatedDeathDomain,也称Mort
10
1)有1个死亡结构域,可与聚集的受体死亡结构
域结合。FADD还有1个死亡效应结构域DED(DeathEffectorDomain),可与caspase28(也称FLICE,MACH)酶原中的类似结构域相结合
和DR5(也称Apo22R,TRAIL2R2,TRICK2,或KILL2
56
ER)、p75神经生长因子受体(NGFR)和禽源的CAR1等。它们的配体依次分别是:CD95、TNFR1、DR3,DR4和DR5的配体分别是CD95L、TNF、淋巴毒
7
。死亡效应
结构域是蛋白相互作用结构域CARD(CaspaseRe2cruitmentDomain)中的一个特例,CARD在许多Caspase中存在,如Caspase22,28,29和210。Caspase28
11
与FADD结合后通过自身剪接而活化
12
,然后激活
素α、Apo3L(也称TWEAK)、Apo2LΠTRAIL(TNF2relatedApoptosisInducingLigand)。CAR1的配体至今还没有发现。
死亡受体在免疫细胞凋亡过程中发挥重要作用,它们通过结合特定的死亡配体而诱导细胞凋。死亡受体与配体结合后的几秒钟内,即可激活效应分子天冬蛋白酶(Caspases)级联(Cascade)反应,并在几小时内使细胞发生凋亡。细胞凋亡的信号传递途径研究一直是细胞分子生物学和分子免疫学的热点课题。亡
8
其下游效应蛋白酶Caspase29使细胞走向凋亡。FADD基因敲除小鼠的FADD显性负突变(FADD2DN)的T细胞研究表明,在抗原刺激下,FADD基因
敲除小鼠的成熟T淋巴细胞增殖缓慢,并可引起胚胎死亡
13217
,表明FADD除了连接Caspase28和CD95
以外还有其它重要的信号传导功能。
病毒和细胞的类FLICE抑制蛋白家族FLIP(FLICE2likeInhibitoryProtein,也称Casper,I2FLICE,FLAME,或CASH)分别称为vFLIP和cFLIP。FILP含
有与Caspase28和FADD类似的死亡效应结构域
17
。
关于FLIP的功能有不同的报道,FLIP过表达既可以
1 CD95的信号传导途径
CD95和CD95L在下述三种生理性免疫细胞凋
抑制凋亡又可以促进凋亡。除了FADD外还有几种胞质蛋白可以与CD95结合亡结构域结合的Daxx
18
2
,包括可以与CD95死
亡中发挥重要作用:①免疫系统中激活的成熟外周T淋巴细胞的克隆消除;②细胞毒T淋巴细胞和天
。Daxx可以激活不依赖
FADD的细胞凋亡途径,这条通路涉及到JNK的激
然杀伤细胞杀死靶细胞,如微生物感染的细胞、衰老的细胞和肿瘤细胞;③免疫豁免器官(如眼睛)中杀死炎症细胞。CD95或CD95L基因缺陷可导致外周淋巴细胞聚集和淋巴肿大等致命的自身免疫综合症
9
活(C2junNH22terminalKinase)。FADD缺陷型细胞可以抵抗CD95诱导的凋亡
13
,表明在一些细胞中,
Daxx与CD95的结合不能诱导细胞凋亡。
。
CD95L可以同源三聚体的形式存在。晶体结构
2 TNFR1的信号传导途径
TNF(TumorNecrosisFactor)主要在激活的巨噬
作者简介:郑德先(1945年-),男,教授,博士生导师。
细胞和T淋巴细胞中表达。TNF与TNFR1结合,激
κ活转录因子NF2B和AP21,诱导促炎因子和免疫调
?520?节因子的表达。在一些细胞中,TNF也可以通过TNFR1诱导细胞凋亡。但是,与CD95L不同的是,TNF只有在蛋白合成被阻断的情况下才可以诱导凋亡,表明细胞中预先存在的一些细胞因子,可以抑制TNF产生的凋亡信号,这些抑制蛋白的表达可能是
由NF2κB和JNKΠAP21调控的19
。TNF三聚体与TNFR1结合诱导受体死亡结构域聚集,聚集的死亡结构域与TRADD(TNFR2associ2atedDeathDomain)的死亡结构域结合。TRADD可招
募几种信号分子与受体结合而形成受体复合物,如
TRAF2(TNFR2associatedFactor)20,21
和RIP(Receptor
InteractingProtein)21
,并进一步激活NF2κB和JNKΠAP21。TRAF2和RIP激活NIK(NF2κB2inducingKi2nase),NIK又激活IKK(I2κBKinase)22
。IKK磷酸化
Iκ2B,导致I2κB降解,使NF2κB进入核内,激活基因转录。在这些蛋白中,只有RIP具有酶活性,属于
Ser和Thr蛋白激酶。但RIP在NF2κB和JNKΠAP21
激活过程中的作用还不大清楚。
MEKK1(MAPΠErkKinaseKinase1,MAP:Mitogen2ActivatedProteinKinase)、JNKK(JNKKinase)和JNK的级联参与从TRAF2和RIP到JNK的信号通路。MEKK1的突变可阻断TNF诱导的JNK激活,表明MEKK1与JNK有关并参与了这条信号通路。但是,MEKK1并没有结合TRAF2,表明上游存在另一个与TRAF2结合的激酶可以代替MEKK1。
在TNF激活NF2κB信号通路中,TRAF2基因敲除小鼠和TRAF2显性负突变转基因小鼠的细胞有轻微的缺陷型表现23
。因此,TRAF2可能不是TNF
激活NF2κB所必需的。TNF不能激活TRAF2缺陷
型细胞中的JNK,表明TRAF2在这条信号通路中起着决定性的作用。而RIP缺陷型细胞正好相反,
TNF不能激活NF2κB,但不影响JNK的激活24
。因
此,RIP是连接TNFR1和NF2κB所必需的,但在连接
TNFR1和JNK中却不是很重要。TRAF2和RIP基因敲除小鼠表现出一些TNF信号通路缺陷所没有的病理现象,表明这两种蛋白还有其它生理功能。TNFR1还可以结合具有抗凋亡活性的哺乳动物和病毒蛋白家族cIAP1和cIAP2(CellularInhibitorofApop2tosisProtein21and22)
25
。
FADD连接TRADD2TNFR1复合物,激活
Caspase28,从而诱导细胞凋亡26
。FADD基因敲除
小鼠的细胞对TNF诱导的细胞凋亡产生完全的抗
性,表明FADD在这条信号通路中起着决定性的作用15
。除了FADD以外,TNFR1还可以结合RAIDD
和CRADD27
。RAIDD的死亡结构域与RIP的死亡
结构域结合,通过与Caspase22类似的CARD结合域诱导凋亡。
3 DR3的信号传导途径
DR3在氨基酸序列上与TNFR1高度同源
28
。
与TNFR1类似,DR3通过TRADD、TNFR2和RIP激
活NF2κB,而通过TRADD、FADD和Caspase28诱导细胞凋亡29
。DR3与和TNF高度同源的Apo3L结合。DR3介导的信号途径是通过TRADD、TRAF2、RIP和
NIK激活NF2κB,通过TRADD、FADD和Caspase28诱
导细胞凋亡。DR3通过Apo3L激活NF2κB和诱导细胞凋亡的调节机制类似于TNF。但是,这些配体和
受体表达有明显不同。TNF主要表达于激活的巨噬细胞和淋巴细胞中,而Apo3L的mRNA在许多正常
组织中呈组成性表达28
。相反,TNFR1在各种组织中广泛表达,而DR3主要在脾、胸腺和激活的T淋
巴细胞中表达28,29
。因此,尽管信号传导机制类似,但Apo3L2DR3和TNF2TNFR1可能具有不同的生物学功能。
4 DR4和DR5的信号传导途径
Apo2LΠTRAIL(Apo2LigandorTNF2relatedApopto2
sisInducingLigand)是TNF基因超家族成员30
。与CD95L相似,Apo2LΠTRAIL可以诱导许多肿瘤细胞
凋亡
30232
。与CD95L不同的是Apo2LΠTRAIL在许多
正常组织中都有表达,而CD95L的转录仅限于激活T淋巴细胞和免疫豁免区的细胞,提示Apo2LΠTRAIL在体内对绝大多数组织并无细胞毒性。但是,在激活后的外周T淋巴细胞中,Apo2LΠTRAIL和CD95L
的转录都提高33
。在IL22的刺激下,一部分成熟的T淋巴细胞对Apo2LΠTRAIL诱导的细胞凋亡敏感,
表明Apo2LΠTRAIL可能在外周T淋巴细胞克隆消除(CloneDeletion)中起一定作用34。此外,人类免疫缺陷病毒(HIV)感染了的T淋巴细胞对TRAIL的敏感性增加,表明TRAIL可能具有杀死HIV感染细胞
的作用33
。
Apo2LΠTRAIL可与TNFR家庭中的5个蛋白分
子结合。其中DR4(DeathReceptor4)5
和DR5(DeathReceptor5)
6
(又称TRAIL2R2,TRICK2或KILL2
ER)35237
含有胞内死亡结构域,可以传导细胞凋亡
信号。DcR1(DecoyReceptor1)
38
(也称TRID,TRAIL2R3或LIT)通过糖磷脂锚定于细胞表面,其传导信号所必需的跨膜区和胞内区(疏水的C末端)
缺失。DcR1可以结合Apo2LΠTRAIL,对Apo2LΠTRAIL敏感的细胞转染了DcR1后,对Apo2LΠTRAIL
的敏感性降低526,39
。细胞表面DcR1受体的糖磷脂锚用磷脂酶切断后可导致细胞对Apo2LΠTRAIL敏感性发生变化。因此,DcR1可作为一个假受体阻止
Apo2LΠTRAIL与死亡受体的结合。DcR2
39
(也称TRAIL2R4或TRUNDD)40242
的胞内区很短,也不能传导凋亡信号。TNFR1诱导凋亡和激活NF2κB必须有6个氨基酸存在,其中4个在DcR2中缺乏。细胞转染DcR2后,可抑制Apo2LΠTRAIL诱导的细胞凋亡。
DcR2胞内区的缺陷并不影响其抑制功能40
,表明此受体也可作为假受体与死亡受体竞争性地结合Apo2LΠTRAIL。有研究表明DcR2过表达可以激活
NF2κB
42,但未得到其它实验支持
39
。编码DR4、
DR5、DcR1和DcR2的基因都定位于人类染色体8p21
～22,表明这些基因起源于共同的祖先基因40,42
。最近又新发现分泌型TNFR家庭成员Osteoprotegerin可
与Apo2LΠTRAIL结合,并抑制其功能43
,该受体定位于8q23～24,与其它4个受体亲缘关系较远。
Apo2LΠTRAIL诱导细胞凋亡需要激活Caspase蛋白酶34
。Caspase28是否参与Apo2LΠTRAIL诱导的细胞凋亡,有一些矛盾的报道。早期的研究表明Caspase210参与DR4和DR5的作用
6
,而且二者均
能与DR4和DR5结合44,45
。FADD13,46
和Caspase28
基因敲除小鼠47
的研究表明,这两个蛋白呈上下游关系,Caspase210不可能代替Caspase28。在Apo2LΠTRAIL诱导细胞凋亡过程中,Caspase28发生了加工作用48,49
。两个独立的研究证明Caspase210显性负突变可以阻断DR4或DR5过表达诱导的细胞凋亡,但对Caspase28显性负突变作用的研究结果则不一致6,44。还有研究表明,Ⅱ型自体免疫淋巴增殖综合症患者中存在两个不同的Caspase210突变体,可能与淋巴细胞对Apo2LΠTRAIL的抗性有关45,50
。
关于FADD显性负突变在DR4和DR5过表达诱导的细胞凋亡中的作用也有争议。一些研究证明
有抑制作用36,51,52
,而另一些研究结果表明没有影响526,38。有趣的是显性负突变的FADD异位表达可阻断CD95L诱导的细胞凋亡,但对Apo2LΠTRAIL诱导的凋亡则没有影响,表明有一条不依赖于FADD的从Apo2LΠTRAIL到Caspase的信号传导通路存在34
。此外,也有些研究表明过表达的FADD可与
过表达的DR4和DR5结合51,52
,但这种现象在其它
研究中没有看到5,6,44
。DR4过表达可引起FADD缺陷型鼠源胚胎成纤维细胞(MEFs)凋亡,表明有一条不依赖FADD的、从DR4到Caspase的信号传导通
路存在13
。以上的研究都是用过表达系统,FADD或受体都处于非生理状态的高水平表达。在这种状
?521?
况下,过表达蛋白的亚细胞定位和化学计量水平有
可能处于反常状态,从而有可能改变了内源性受体和结合蛋白的相互作用。最近,用免疫共沉淀的方法获得了Apo2LΠTRAIL引起内源性FADD和Caspase28
被募集到DR4和DR5上的直接证据53
,Apo2LΠTRAIL可以与DR4和DR5形成同源多聚体或异源多聚体,而且每一个受体都可以独立地募集FADD和Caspase28,表明Apo2LΠTRAIL与CD95L具有类似的凋亡信号传导途径,并有力地证明了FADD是一个具有普遍意义的死亡结构域结合蛋白。
除了FADD以外,过表达TRADD52
或RIP5
可以结合过表达的DR4和DR5,推测这些受体有可能形成与TNFR1受体相类似的受体复合物。另有文
献报道,RIP是Apo2LΠTRAIL激活IKK(I2κBKinase)
和JNK所必需的。过表达显性负RIP突变体阻断了Apo2LΠTRAIL激活IKK和JNK。而在RIP基因敲除
的成纤维细胞中,Apo2LΠTRAIL不能激活IKK,只部分地抑制了JNK的激活。在Apo2LΠTRAIL处理过的细胞中,内源性的RIP存在于受体复合物中,但是RIP并没有参与Apo2LΠTRAIL诱导的细胞凋亡。TRAF2在Apo2LΠTRAIL激活JNK中起重要作用,而
在Apo2LΠTRAIL激活IKK中几乎没有作用54
。
DR4和DR5以相似的亲和力与Apo2LΠTRAIL结合42,凋亡信号传导途径也相似53
。通常情况下这两种受体共表达并与Apo2LΠTRAIL形成异源多聚体,也可独立传导信号。在体内多种组织中,这两种受体的mRNA表达水平不同。细胞中存在两个相似的Apo2LΠTRAIL受体的可能原因是为了在多种组织中实现更为严谨的基因表达调控。可以肯定的是DR4和DR5还有一些其它不明确的信号传导功能。迄今虽有一些实验表明Apo2LΠTRAIL在免疫细
胞凋亡中发挥一定的作用45,48,55,56
,但其生物学功能还不十分明确。Apo2LΠTRAIL与DR4和DR5类似,在许多人类组织中表达,但Apo2LΠTRAIL不能诱
导大多数正常细胞凋亡55,57
。许多肿瘤细胞表达DR4和DR5,没有或几乎不表明DcR1和DcR2,表明DcR1和DcR2不是癌细胞对Apo2LΠTRAIL敏感性的
重要调控分子。相反,正常组织表达DcR1和Π或DcR2可能与正常细胞对Apo2LΠTRAIL的抗性有关。在一些黑色素瘤细胞中c2FLIP的表达水平与细胞
对Apo2LΠTRAIL敏感性有关48
,表明c2FLIP可能是调节细胞对Apo2LΠTRAIL敏感性的分子58
。但是,在直肠癌、肺癌和胸腺瘤细胞系中,c2FLIP的表达水平与细胞对Apo2LΠTRAIL的抗性无关。另外,在接受抗原受体刺激的早期T细胞对CD95L的抗性也
?522?不依赖于c2FLIP59
。最近有研究表明,在PNET(PrimitiveNeuroectodermalTumors)60和NB(Neuroblas2
toma)细胞61
中,Caspase28mRNA不表达是对Apo2LΠTRAIL产生抗性的重要机制,并证明了基因甲基化
抑制了Caspase28在这些细胞中的表达。
细胞在受到化学药物或X2射线损伤后,抑癌基因p53能激活细胞内的自杀机制,但死亡受体激活的细胞凋亡不受p53表达的影响。由于TNF和CD95L具有强烈的毒副作用(如TNF介导严重的炎症反应,CD95L引起严重的肝损伤),使其临床应用研究受到了限制。Apo2LΠTRAIL与TNF和CD95L相比,具有许多不同之处:首先,DR4和DR5过表达可
以激活NF2κB34,但Apo2LΠTRAIL本身只引起微弱的反应,需要比TNF高许多倍的剂量才能引发较强
的NF2κB反应37
;其次,Apo2LΠTRAIL的mRNA在一些组织中组成性表达;第三,Apo2LΠTRAIL受体DR4和DR5在许多正常组织和肿瘤细胞中表达,DcR1和DcR2只在正常组织中高表达,而在肿瘤细胞中几乎不表达。这种死亡受体和假受体表达的差异可能导致Apo2LΠTRAIL诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有影响,因此Apo2LΠTRAIL可能具有良好的临床应用前景。
对CD95L和TNF及其下游效应分子的信号传导途径已有大量报道。DR3和TNFR1的信号通路相似,但从DR4和DR5到Caspase的信号传导途径明显不同,其分子机制尚不清楚。最近又发现一个GTP结合蛋白DAP3可以介导DR4或DR5与FADD
的结合,并激活Caspase28
62
。
5 T淋巴细胞中DR4死亡结构域结合蛋白
的分子克隆与鉴定
为了阐明TRAIL诱导细胞凋亡的信号传导途径,笔者的实验室以DR4死亡结构域为钓铒,采用酵母双杂交系统筛选人淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库,获得了两个阳性克隆,DNA测序结果表明:其中一个克隆的插入片段与人类甲酰肽受体1(FPRL1)的mRNA高度同源,并证明FPRL1可与DR4特异性结
合,其生物学功能是降低细胞对Apo2LΠTRAIL的敏感性,从而对细胞凋亡起保护作用。同时FPRL1与DR4的磷酸化和异源脱敏化有关。令人感兴趣的是FPRL1是G蛋白受体家族成员,其与DR4特异性的结
合提示G蛋白受体与TRAIL受体介导的信号传递途径之间存在着信息通讯(CrossTalk)。另一个克隆的插入片段与基因数据库中的已知序列无同源性。这些结果为进一步研究免疫细胞受体介导的细胞凋亡
信号传导途径打下了基础。
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[收稿2003203220(编辑 张 慧)
>>
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