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摘 要：2015年8月，河南新郑某鸡场30日龄肉鸡突然出现死亡。病死鸡心包内存在大量积液，肝脏充血、肿大。PCR检测禽腺病毒4型核酸，呈现阳性，结合发病情况和剖检病变，诊断为禽腺病毒4型感染。然后对该鸡场采取了综合防制措施，取得了较好的效果。
关键词：心包积液；禽腺病毒4型；诊断；防制
中图分类号 S852.65 文献标识码 A 文章编号 1007-7731
Abstract：In August 2015，some thirty-day-old broilers in Henan Province were affected with a disease characterized by an accumulation of near-amber fluid in the pericardial sac and an enlarged discolored liver with foci of hemorrhage. Fowl adenovirus-4 was positive for PCR detection. Combined with the epidemiology investigation，and autopsy results，infection of fowl adenovirus-4 was diagnosed. Then the situation had been effectively controlled by the integrated prevention measures.
Key words：Hydropericardium；Fowl adenovirus-4；Diagnosis；Preventive treatment
禽心包积水-包涵体肝炎综合征引起的一种高度传染性和高死亡率的新型家禽疾病。该病的发病特征为3～5周龄鸡突然死亡，死亡率高达80%[1]。该病没有明显的临床症状，个别鸡在死亡前出现精神沉郁、羽毛卷曲等临床表现。病死鸡的剖检病变，主要为心包腔中蓄积有大量的淡黄色水样或胶状液体，心脏松弛，肝脏充血、肿大。该病呈急性经过，死亡率高，给禽业生产带来了巨大的经济损失。
2015年8月，河南新郑某鸡场30日龄肉鸡突然出现死亡，剖检可见大量心包积液、肝脏肿大充血和肾脏充血肿大等病变。根据发病情况、剖检变化和实验室诊断，诊断为禽腺病毒4型感染。
1 发病情况
该鸡场饲养了2 000多只30日龄肉鸡，鸡群中突然出现鸡只零星死亡，3d后死亡数高达100多只，剖检病死鸡，可见大量心包积液、肝脏肿大充血和肾脏充血肿大。常用药物均不能达到良好的控制效果。
2 临床症状与剖检结果
临床症状不明显，呈急性死亡。个别鸡在死亡前出现体温升高、积聚堆积、食欲下降、精神不振、垂头闭眼等不良表现。病死鸡剖检主要呈现为心包腔内有大量淡黄色液体或果冻状物，偶见心包有绿色液体，肝脏充血肿大、质脆色淡，心肌松弛，脾脏、肾脏充血肿大，肺脏水肿，个别病例出现法氏囊肿大以及肠道血管堵塞。
3 实验室诊断
3.1 病料DNA提取 剖检病死鸡，采集肝脏组织，剪碎、研磨混合后，按1∶5比例加入生理盐水制成组织悬液，反复冻融3次后，离心取上清液400μL，加入等体积SDS裂解液（终浓度为100μg/mL），再加入6μL蛋白酶K（终浓度为200μg/mL），使其充分混匀，置于55℃水浴条件下消化3h；加入等体积Tris平衡酚，混匀，12 000r离心5min；取上清液，经等体积酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）、氯仿：异戊醇（24∶1）、氯仿各抽提1次，加入1.5倍体积异丙醇于-70℃放置30min，使其沉淀，12 000r离心5min弃上清液，取500μL70%乙醇洗涤2次；自然干燥后用20μL ddH2O溶解，贮存于-20℃备用。
3.2 引物设计与合成 据报道FAV-4六邻体的抗原表位区主要集中在前段、中段，具有型和群特异性表位，可作为诊断型和群的首选蛋白[2]。因此，根据GenBank公布的FAV-4GC株Hexon基因序列（EU）保守）区段，使用引物设计软件，设计了1对引物，预计扩增片段为421bp。上游引物为P1：5′-CGAGGTCTATACCAACACGAGCA-3′；下游引物为P2：5′-CGGCGCAGGTTAATGAAGTTATC-3′。
3.3 PCR扩增 PCR反应采用25μL体系：Premix Taq12.5μL，上下游引物（50μmol/L）各0.5μL，模板DNA 3μL，用灭菌的ddH2O补至25μL。PCR扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性50s、53℃退火45s、72℃延伸50s，35个循环；72℃延伸10min。PCR反应完毕后，取6μL PCR产物，1.0%琼脂糖凝胶进行电泳，于紫外灯下观察电泳结果。电泳结果显示，待检样本中可扩增出1条约400bp的目的条带（图1），而阴性对照未出现条带。而用禽流感病毒、新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的引物，进行RT-PCR检测，结果均为阴性。再结合发病情况和剖检变化，诊断为禽腺病毒4型感染。
4 防治措施
应采取综合防治措施，饲养管理、防疫、消毒、免疫及监测5个环节缺一不可。加强饲养管理，注意饲料营养，减少应激，提高鸡群的整体健康水平；特别强调各阶段、各批次鸡整进整出。严格执行防疫和消毒制度，杜绝强毒污染和入侵，同时使用疫苗和药物进行预防。坚持定期的免疫监测，随时调整免疫计划，使鸡群始终保持有效的抗体水平。值得注意的是，IBDV和鸡传贫血病毒都能诱发腺病毒的感染与致病，所以家禽应正确地接种这两种疾病的疫苗。
对于FAV-4引起的禽心包积水-包涵体肝炎综合征，目前尚无有效的治疗药物。平时采取综合防制措施和FAV-4灭活疫苗免疫接种进行预防。一旦发病，采用临床上患心包积液、肝肾肿大等病变的死鸡肝脏甲醛灭活疫苗进行紧急接种，同时使用退烧药和消炎药给鸡饮水，饲喂保肝护肾药物，4～5d后即可收到较明显的治疗效果。总之，围绕抗病毒、利水消肿、保肝护肾、防治继发感染等原则积极采取正确的治疗手段，既可基本控制病情。
参考文献
[1]Asthana M，Chandra R，Kumar R.Hydropericardium syndrome：current state and future developments[J].Arch Virol，2013，158（5）：921-31.
[2]文艳玲，谢芝勋，黄琦，等.禽腺病毒1型和4型六邻体蛋白抗原表位和密码子偏爱性分析[J].动物医学进展，2007，28（11）：17.
（责编：张宏民）
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